IV этап (через 18-24 час от начала исследования)

III этап (через 12-16 час от начала исследования)

II этап (через 6-8 час от начала исследования)

I этап

Лабораторная диагностика холеры

МЗ РБ Инструкция 1.2.11-17-8-2004

Иммунитет

У лиц, перенесших холеру, развивается прочный антиинфекционный (антитоксический и антибактериальный) иммунитет, длительный, повторные случаи редко встречаются. Он обусловлен антитоксическими и антимикробными Ат, клетками иммунной памяти и фагоцитами.

1. Материал в объеме 0,5-1,0 мл засевают пипеткой в 50-100 мл накопительной среды (1% пептонная вода) и инкубируют 37^оС 6-8 час.

2. Материал засевают петлей на щелочной агар (ЩА) и инкубируют при 37^оС не менее 14-16 час, а также на одну из элективных сред (ЭС) или TCBS.

3. С материалом проводят ускоренные методы диагностики:

1. иммунолюминесцентный;

2. реакцию иммобилизации холерных вибрионов специфической холерной О-сывороткой;

3. полимеразную цепную реакцию со специфическими праймерами.

1. С первой среды накопления делают высев на ЩА и одну из ЭС и в 5-8 мл второй среды накопления. Пересевы в жидкие и на плотные среды делают с поверхности жидкой среды большой бактериологической петлей диаметром 5 мм. Режимы инкубации посевов как на 1 этапе.

2. При отрицательных результатах исследования нативного материала ускоренными методами их повторяют после 6 час инкубации первой среды накопления (с пленкой).

1. Высев со второй среды накопления на ЩА и инкубируют при 37^оС 14-16 час. В случае необходимости ускорения хода анализа материала от больного или подозрительного на заболевание холерой, отбор колоний со ЩА, засеянного в начале исследования, можно начинать уже на этом этапе, в остальных случаях – на следующем.

1. Отбор подозрительных на холерный вибрион колоний в посевах на плотные среды нативного материала, а также в высевах из 1-ой и 2-ой накопительных сред.

Чашки с посевами просматривают в проходящем свете невооруженным глазом или с помощью лупы, также под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете и отбирают подозрительные на вибрионы колонии для выделения и идентификации культуры.

2. Подозрительные колонии проверяют в слайд-агглютинации с сывороткой холерной 01 в разведении 1:50 – 1:100. При положительной реакции ставят слайд агглютинацию с сыворотками Инаба и Огава в том же разведении.

3. Приготавливают мазки для окраски по Граму и обработки флюоресцирующими иммуноглобулинами.

4. При отрицательных результатах колонии, обнаруженные в посевах материала от больных, проверяют в слайд-агглютинации с холерными сыворотками 0139 и RО.

Положительная ориентировочная реакция агглютинации с холерной 01 сывороткой в разведении 1:100 и вариантно-специфической Инаба или Огава в разведении 1:50 или положительная реакция с флюоресцирующими иммуноглобулинами в сочетании с морфологическими культуральными признаками и специфической иммунобилизацией позволяют выдать на соответствующем этапе предварительный ответ об обнаружении в исследуемом материале холерного вибриона 01, а в случае положительной реакции с сывороткой 0139 – холерного вибриона 0139 серогруппы.

5. Подозрительные на вибрионы колонии, агглютинирующиеся и не агглютинирую-щиеся холерными 01 и 01 39 сыворотками, отсевают:

а) на одну из полиуглеводных сред (Ресселя, Клиглера, лактозосахарозная, маннозо-сахарозная и др.) для первичной идентификации;

б) и на сектор чашки с ЩА для выделения чистой культуры.

Дата добавления: 2014-01-20