Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция), стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция) и с помощью циклонов.

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки. Для определениягрупповой принадлежности крови у человека используются три стандартные сыворотки 0(I), A(II), B(III), и реже - AB(IV) группы. Они готовятся главным образом из крови, редко из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Чаще всего кровь берется от доноров, может быть использована трупная или ретроплацентарная кровь. После отстаивания крови забирается сыворотка, к которой добавляется консервирующее вещество – борная кислота из расчета 3,0 порошка на 100мл сыворотки, но лучше прибавлять ее немного больше. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки должны удовлетворять следующим требованиям:

1. В течение 15 – 20 с. должна появиться агглютинация с соответствующими эритроцитами, а через 2 минуты агглютинация должна быть четкой.

2. Не давать агглютинации с эритроцитами нулевой группы и одноименной.

3. Иметь титр не ниже 1:32.

4. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков бактериального загрязнения.

5. На каждой ампуле должен быть паспорт с обозначением группы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы (одна, две, три, четыре).

Для предупреждения возможных ошибок при определении групп крови производится окраска стандартных изогемагглютинирующих сывороток:

Группы A(II) – в синий цвет, B(III) - в розовый, AB(IV) – синий, 0(I) – не окрашивается, хранятся сыворотки при температуре +8 - 9º герметично закрытыми. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (0, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий.

Методика определения группы крови: определение группы крови производят при температуре от +15 до +20ºС. на тарелках или планшетах. На левой стороне планшета надписывают группы крови в буквенной транскрипции. Посередине верхнего края планшета отмечают фамилию донора (реципиента). Используют стандартные сыворотки двух серий трех групп (О, А, В) с титром не ниже 1:32. На тарелку или планшет наносят по одной две капли стандартных сывороток в два ряда, начиная с первой группы слева направо. Капли крови наносят пипеткой около каждой капли сыворотки и смешивают углом предметного стекла. Количество крови должно быть в 8 – 10 раз меньше, чем сыворотки. Затем планшет осторожно покачивают в руках, что способствует быстрой и четкой агглютинации. Агглютинация начинается на 3 минуте. По мере наступления агглютинации, добавляют по одной капле физиологического раствора и продолжают наблюдать до истечения 5 минут. Результат читают в проходящем дневном свете, если агглютинация нечеткая, к смеси добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего дают окончательное заключение о групповой принадлежности.

1. Отсутствие агглютинации во всех трех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

2. Наступление агглютинации в каплях с сыворотками 0(I) и B(III) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген А, т. е. кровь относится к группе A(II).

3. Наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы 0(I) и A(II) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т. е. кровь группы B(III).

4. Агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т. е. кровь относится к группе AB(IV). Однако в этом случае учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо нанести на планшет или тарелку две-три капли стандартной сыворотки группы AB(IV) и добавить к ним 1 каплю исследуемой крови. Сыворотку и кровь перемешивают, и результат реакции наблюдают в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к группе AB(IV). Если же агглютинация появляется с сывороткой группы AB(IV), значит, реакция неспецифическая.

Определение группы крови двойной реакцией (по стандартным сывороткам и стандартным эритроцитам).

Данная методика позволяет определить наличие в крови агглютиногенов А и В, агглютининов α и β, т. е. определить полную формулу крови

Определение групповой принадлежности крови с использованием цоликлонов анти – А и анти – В. Цоликлоны анти – А и анти – В являются продуктом гибридомных клеточных линий. Это моноклональные анти – А и анти – В антитела, которые продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти – А и анти – В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса (I, G, M), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.

Дата добавления: 2014-01-20