Рекомендованный материал

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. МГУ, М. 1985. Стр. 14-17, 94-108.

2. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Егоров Н.С. МГУ, М. 1995. Стр. 56-80, 193-201, 151-154.

3. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец. литература», С-Петербург. 1998. Стр. 18-31.

ЗАНЯТИЕ 14

ТЕМА: Энергетические процессы микроорганизмов.

Вопросы для рассмотрения.

1.Основные типы брожения.

2.Освобождение энергии в аэробных условиях.

Задание для выполнения лабораторной работы

1.Приготовить окрашенный препарат молочнокислых бактерий; микроскопировать его и зарисовать.

2.Приготовить препарат из маслянокислых бактерий, микроскопировать и зарисовать.

3. Приготовить окрашенный препарат из культуральной жидкости; микроскопировать его, найти и зарисовать микроорганизмы окисляющие жир.

1.Исследование молочнокислых бактерий

Для микроскопических наблюдений молочнокислых бактерий готовят препарат из прокисшего молока, кефира, йогурта, ряженки, ацидофилина, простокваши. Бактериологическую петлю вводят в сгусток и, повернув вокруг оси, извлекают, прикасаясь ею к пленке. Сгусток размазывают на предметном стекле очень тонким слоем без воды. Сушат на воздухе. Фиксируют смесью Никифорова, несколько раз, нанося избыток смеси на мазок и сливая ее. При такой фиксации не только погибают бактерии и прикрепляются к стеклу, но и параллельно эфиром извлекается жир, и удаляется. Фиксированный препарат окрашивают метиленовым синим в течение 2-3 мин, промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсией.

2.Микроскопирование маслянокислых бактерий.

Питательную среду берут из пробирки пипеткой, погружая ее в средний слой сброженной жидкости. Наносят каплю на предметное стекло, добавляют каплю раствора Люголя и покрывают покровным стеклом. Микроскопируют с иммерсией. В клетках можно заметить овальные тельца, сильно преломляющие свет, - это споры. В тех местах клетки, где содержится гранулеза, возникает синее окрашивание. Зарисовать окрашенные клетки, явно относящиеся к группе маслянокислых бактерий.

3.Микроскопирование микроорганизмов, окисляющих жир.

Из колбы берут немного жидкости и готовят мазок. Сушат на воздухе, фиксируют смесью спирта с эфиром и окрашивают фуксином 1-2 мин. При микроскопировании с иммерсионным объективом можно обнаружить неспороносную палочку Pseudomonas fluorescens.

Жир могут окислять также актиномицеты и грибы, особенно рода Oidium lactic.

Контрольные вопросы

1. Спиртовое брожение.

2. Молочнокислое брожение.

3. Маслянокислое брожение.

4. Брожение пектиновых веществ.

5. Брожение целлюлозы.

6. Окисление этилового спирта в уксусную кислоту.

7. Окисление углеводов плесневыми грибами с образованием лимонной кислоты.

8. Окисление клетчатки.

9. Окисление жира.

Рекомендованный материал.

1. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр. 104-121.

2. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. МГУ, М. 1985. Стр.328-364.

3. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. «Колос», М. 1978. Стр. 84-125.

4. Шлегель Г. Общая микробиология.»Мир», М. 1972. Стр. 240-278, 288-300, 347-380.

ЗАНЯТИЕ 15

ТЕМА: Превращение микроорганизмами азотистых

веществ и соединений серы, железа, фосфора.

Вопросы для рассмотрения.

1. Процессы аммонификации.

2. Процессы нитрификации и денитрификации.

3. Биологическая фиксация атмосферного азота.

4. Превращение микроорганизмами соединений серы, железа, фосфора.

Задание для выполнения лабораторной работы

1.Микроскопировать и зарисовать возбудителей аммонификации белковых веществ.

2.Микроскопировать и зарисовать азотфиксирующих бактерий свободноживущих в почве.

3.Микроскопировать и зарисовать тионовые бактерии.

4. Микроскопировать и зарисовать железобактерии.

1.Исследование возбудителей гнилостного распада белковых веществ.

Для обнаружения возбудителей готовят препарат живых бактерий

(в раздавленной капле). Чаще других в препарате встречаются подвижные клетки Prоteus vulgaris, преобладающие на первых стадиях распада белков. Это не спорообразующие, неодинаковой длины палочки. Кроме того, на препарате много спорообразующих клеток Bac.mycoides и Bac.putrificus. У последних споры располагаются терминально и диаметр их шире клетки. Bac.mycoides вызывает аммонификацию белковых веществ в аэробных условиях, Prоteus vulgaris - факультативный анаэроб, а Bac.putrificus вызывает аммонификацию в анаэробных условиях, но может развиваться, если в среде находятся аэробные микроорганизмы, поглощающие кислород.

2.Микроскопирование азотфиксирующих бактерий свободноживущих в почве.

Из группы этих микроорганизмов наибольший интерес представляют бактерии рода Clostridium и Azotobacter.

Clostridium pasteurianum фиксируют азот из атмосферы в анаэробных условиях. Энергию для этого клетки получают за счет маслянокислого брожения. Для выявления азотфиксаторов из почвы и других мест обитания используют безазотную среду Виноградского:

глюкоза...................20,0г

К₂НРО.......................1,0г

МgSО₄..........................0,5г

NаСl........................0,5г

дистил. вода..............1000мл

Clostridium pasteurianum обычно находится в осадке мела и почвы. Для его обнаружения содержимое колбы хорошо размешивают или взбалтывают и дают осесть крупным частицам. Затем из середины субстрата пипеткой набирают суспензию и каплю наносят на предметное стекло, к которой добавляют каплю раствора Люголя и микроскопируют. Клетки Clostridium pasteurianum содержат в цитоплазме гранулезу, которая от раствора Люголя приобретает синий цвет. Среди них преобладают веретенообразные формы с продолговатыми спорами.

Для обнаружения Azotobacter используют жидкую среду Бейеринка:

манит (или глюкоза, или сахароза)............20,0г

К₂НРО..............................................................0,2г

СаСО₃...............................................................5,0г

водопроводная вода........................................1000мл

Для микроскопирования берут каплю суспензии из верхнего слоя жидкости и готовят препарат “раздавленная капля”. Обнаруживаются клетки азотобактера в виде диплококков.

3.Исследование тионовых бактерий.

Для выращивания тионовых бактерий используют среду следующего состава:

Na₂ S ₂O₃.......................5,0г

Na HCO₃...................... 1,0г

K ₂HPO.......................... 0,2г

NH₄ Cl............................ 0,1г

MgCl₂............................. 0,1г

Из колбы каплю жидкости помещают на предметное стекло и готовят препарат “раздавленная капля”. При микроскопировании обнаруживаются бактерии Thiobacillus thioparus.

Дата добавления: 2014-12-10