Методи розеткоутворення

Імуноферментні методи

Метод передбачає використання немічених моноклональних антитіл, які інкубують з клітинами. Візуалізація реакції здійснюється за допомогою допоміжних антитіл (наприклад, антитіла кози проти імуноголобулінів миші, якщо моноклональні антитіла були отримані на основі мишиної гібридоми). До допоміжних антитіл приєднується пероксидазна мітка, внаслідок чого при взаємодії фермент-субстрат виникає реакція, яку можна спостерігати за допомогою мікроскопу. Цей метод використовують невеликі лабораторії, які не мають дорогого обладнання.

Використовуються у клінічній імунології з початку 70-х років. Методи розеткоутворення є найдешевшими серед методів кількісного визначення субпопуляцій лімфоцитів. Методи розеткоутворення засновані на феномені прилипання до поверхні клітини корпускулярних часток. Найбільш простими є методи розеткоутворення з еритроцитами тварин. Тест розеткоутворення з еритроцитами барана (Е-РУЛ) використовують для виявлення Т- лімфоцитів (доведено, що СD2 рецептори Т-лімфоцитів ідентичні Е - рецепторам і мають спорідненість до глікопротеїнів мембрани еритроцитів барана). Тест розеткоутворення з еритроцитами миші (М-РУЛ) використовують для виявлення В- лімфоцитів.

Для постановки реакції суспензію лімфоцитів інкубують з суспензією еритроцитів тварин. Після цього підраховують кількість клітин, які утворили розетки. Розеткою називають клітину, до якої прикріплені не менше, ніж три еритроцити.

При підрахунку знаходять 100 або 200 лімфоцитів і вираховують відсоток розеток серед них. Знаючи загальну кількість лімфоцитів, можна кількісно підрахувати чисельність популяцій.

Відносна кількість основних субпопуляцій лімфоцитів в крові:

Показник	0-3 мес.	3-12 мес.	1-2 роки	2-6 років	6-16 років	16-80 років
CD3+ (Т-лф)	55-78%	45-79%	53-81%	62-80%	66-76%	55-80%
CD4+ (Т-хелпер)	41-64%	36-61%	31-54%	35-51%	33-41%	31-51%
CD8+ (Т- кілер)	-	-	-	-	-	19-37%
CD3+/ CD4+	41-64%	36-61%	31-54%	35-51%	33-41%	31-49%
CD3+/ CD8+	16-35%	16-34%	16-38%	22-38%	27-35%	12-30%
CD3-/CD16+/ CD56+ (ПК)	2-14% (1-4 м)	2-13% (4-12м)	3-16%	4-23%	4-27%	6-20%
CD3+/HLA-/DR+ (акт.Т-лф)	1-9% (1-4 м)	1-7% (4-12м)	3-12%	3-13%	1-8% (6-9р) 3-14% (9-12р) 1-8% (12-16р)	0-12%
CD19+ (В-лф)	19-31%	19-31%	19-31%	21-28%	12-22%	5-19%
CD20+ (зрілі В-лф)	19-31%	19-31%	19-31%	21-28%	12-22%	5-19%
CD4+/ CD8+(ІРІ)	-	-	-	-	-	1,0-2,5%
CD3+/CD4+, CD3+/ CD8+	-	-	-	-	-	1,5-3,0%

Клінічне значення визначення субпопуляції лімфоцитів:

Показник	Підвищення показника
Т- лімфоцити (CD3+)	Іммунне запалення
Т- хелпери (CD4+)	Активний запальний процесс
Т – кілери (CD8+)	Активний запальний процесс при вірусній, грибковій інфекції, онкологічні хвороби
Натуральні кілери (CD3- CD16+ CD56+)	Гострі інфекції, активний запальний процесс, онкопроцесс
Т-натуральні кілери (CD3+ CD16+ CD56+)	Хронічний запальний процесс
Активовані Т-лф (CD3+HLA-DR)	Генералізованний гострий та активний хронічний запальний процесс
Подвійні негативні Т-лф (CD3+ CD4+ CD8+)	Гострий та активний хронічний запальний процесс
В-лімфоцити, В-лф (CD19+, CD20+, CD21+, CD22+, CD72+	Гострий та активний хронічний запальний процесс
Нульові лімфоцити	Порушення гемопоезу на рівні кісткового мозку.

Дата добавления: 2014-12-17