С использованием C1q

Постановка метода. При отборе проб крови необходимо соблюдать ряд предосторожностей, поскольку связанные иммунные комплексы при образовании сгустка легко высвобождаются под действием фактора I. Чтобы избежать этого, следует быстро отделять эритроциты от плазмы.

Для идентификации средних и крупных комплексов, содержащих антитела IgG, часто используют осаждение иммунных комплексов раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ 6000) в 0,1м натрий-боратном буфере pH 8,4 с последующим определением IgG в осадке. Рабочую смесь готовят из расчета 100 мкл сыворотки крови больного и 200 мкл буфера. К 0,9 мл раствора ПЭГ добавляют 100 мкл рабочей смеси, в пробирку контроля к 100 мкл рабочей смеси добавляют 0,9 буфера. Обе пробирки выдерживают 1 час при комнатной температуре с последующей спектрофотометрией на СФ 26 при длине волны 450 нм. Количество ЦИК определяют по разнице оптической плотности по сравнению с контролем и выражают в условных единицах. На этом принципе основан ряд коммерческих систем определения иммунных комплексов.

Определение содержания цитокинов в сыворотке крови

Важной функцией моноцитов и лимфоцитов крови являются продукция и секреция цитокинов. Цитокины – это регуляторные белки иммунной системы, играющие критическую роль в межклеточных коммуникациях и опосредующие ряд биологических функций, таких как рост и дифференцировка клеток в гемопоэзе, эффекторные и регуляторные функции иммунокомпетентных клеток.

На сегодняшний день наиболее оптимальными для оценки уровней цитокинов являются иммуноферментные методы. Применение диагностических иммуноферментных тест-систем для оценки цитокинового статуса как на местном, так и на системном уровнях при различных патологиях является существенным, позволяя углубить понимание патогенеза заболеваний. Оценка способности лимфоцитов и моноцитов крови продуцировать цитокины (интерлейкины, интерфероны) в последнее время все чаще используется для проверки их функциональной полноценности.

IL-2. Содержание в культуральных жидкостях и сыворотке крови определяется в интервале концентраций от 20 до 1000 пг/мл (1пг=10^-12г). IL-2 представляет собой гликопротеин, синтезируемый Т-лимфоцитами при активации митогенами или антигенами. IL-2 играет ключевую роль в развитии иммунного ответа. Низкий уровень IL-2 наблюдается при целом ряде заболеваний: злокачественных опухолях, рассеянном склерозе, склеродермии, ревматоидных артритах, инсулинозависимом диабете, СКВ и др.

IL-1 -b определяется в образцах сыворотки и культуральных жидкостях в диапазоне концентраций от 6,3 до 400 пкг/мл. Основными источниками IL-1b являются моноциты, макрофаги и дендритные клетки. В отличие от IL-1a, IL-1b представлен в виде растворимой формы. Благодаря выраженным иммуномодулирующим свойствам рекомбинантная форма IL-1b применяется в клинической практике для лечения иммунодефицитов и восстановления гемопоэза.

RAIL-1 (рецепторный антагонист IL-1). Содержание в сыворотке здоровых доноров варьирует от 350 до 700 пг/мл. Продуцируется макрофагами, моноцитами, нейтрофилами, фибробластами и эпителиальными клетками. RAIL-1 подавляет биологическую активность IL-1a и IL-1b, конкурируя с ними за связывание с рецепторами. Определение концентрации RAIL-1 в крови человека может иметь диагностическое и прогностическое значение при сепсисе, ревматоидном артрите, астме и воспалительных заболеваниях.

IL-4 продуцируется активированными Т-лимфоцитами. IL-4 стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов, костномозговых клеток - предшественников и тучных клеток. IL-4 вызывает экспрессию ряда поверхностных антигенов и стимулирует продукцию цитофильных иммуноглобулинов. Его многочисленные биологические функции включают индукцию переключения продукции иммуноглобулинов плазматическими клетками на продукцию IgE и стимуляцию субпопуляции Т-хелперов – Th2, которые регулируют гуморальный иммунный ответ. IL-4 также обладает выраженной противоопухолевой активностью.

IL-8 продуцируется мононуклеарными фагоцитами, полиморфноядерными лейкоцитами, эндотелиальными клетками и разнообразными мезотелиальными типами клеток в ответ на различные стимулы, включая эндотоксин, IL-1, TNF-a и вирусы. Первичная функция IL-8 - активация и хемотаксис нейтрофилов к месту воспаления. В настоящее время проходят испытания препаратов для лечения ран на основе IL-8.

IFN-α является одним из ключевых элементов неспецифической защиты организма от вирусных инфекций. IFN-αсинтезируется клетками моноцитарно-макрофагального ряда. Практически все типы клеток при должной стимуляции могут стать продуцентами IFN-a, однако максимальные количества IFN-a продуцируют предшественники дендритных клеток. В норме уровень альфа-интерферона в сыворотке крови незначителен и составляет всего несколько единиц: 5-50 пкг на 1 мл сыворотки. Основными индукторами синтеза IFN-a являются большинство вирусов и их продуктов, среди которых ведущее место занимает двухцепочечная РНК. Биологические функции IFN-a направлены на подавление вирусной инфекции и опухолевого роста. Препараты на основе IFN-a активно используются в клинической практике.

IFN -g продуцируется Т-лимфоцитами и натуральными киллерами. Стимулирует in vitro и in vivo антимикробную и противоопухолевую активность макрофагов, а также натуральных киллеров. IFN-g стимулирует экспрессию молекул МНС класса II, является кофактором дифференцировки и активации В-клеток и функциональным антагонистом IL-4.

TNF-a. Макрофаги выступают основными продуцентами TNF-a в ответ на многочисленные стимулы: митогены, цитокины, бактерии, вирусы и паразиты. Несмотря на противоопухолевую активность, TNF-a играет большую роль в модуляции иммунного ответа, воспаления и гемопоэза; участвует в противоопухолевом иммунитете, а при избыточной продукции вызывает анорексию, кахексию и септический шок.

Дата добавления: 2014-11-29