Работа № 2

Теоретическая справка

Работа № 1

Основные принципы выделения и идентификации чистых культур бактерий

Чистую культуру бактерий получают для проведения дифференциально-диагностических исследований - идентификации, которая достигается путем определения морфологических, культуральных, биохимических и других признаков микроорганизмов.

Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами и нативных препаратов.

Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями, условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Они устанавливаются по характеру роста на питательной среде.

При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии и питательную среду в разнообразные цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый пигмент -Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый пигмент - Pseudomas aeruginosa (синегнойная палочка).

Питательные среды (состав некоторых питательных сред)

Кровяной агар (для выявления микроорганизмов, вызывающих гемолиз). К расплавленному и охлажденному до 45°С МПА (2% агара) стерильно добавляют 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана.

Пептонная вода. Основной раствор пептона: пептона - 100 г, хлорида натрия -50 г, нитрата калия - 1 г, карбоната натрия - 25 г, воды дистиллированной - 1 л; рН 9,0. Стерилизуют при 120°С 20 мин. Для получения пептонной воды основной раствор разводят водой в 10 раз, доводят рН до 8,8 -8,9, стерилизуют. Используют для культивирования холерных вибрионов.

Свернутая сыворотка. Кровь берут от крупных животных. В продаже имеется стерильная нормальная сыворотка крови животных для бактериологических питательных сред, расфасованная по 250 мл. Можно пользоваться человеческой сывороткой (отходами производства гамма-глобулина), остатками крови при постановке реакции Вассермана и других серологических реакций.

Среды Гисса с углеводами. Пептон - 10 г, хлорид натрия - 5 г, углевод - 10 г, реактив Андреде - 10 мл, вода дистиллированная до 1000 мл, рН после стерилизации 7,2-7,4. Дифференциально-диагностическая среда, на которой выявляют разложение углеводов микроорганизмами.

Мясопептонный агар (МПА). К готовому МПБ добавляют 2% агар и оставляют для набухания 30 мин. Кипятят до полного растворения агара. Стерилизуют 30 мин при 120°С. Применяют для выращивания большинства сапрофитных бактерий.

Среда 199. Синтетическая среда, содержащая аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли. Для выращивания клеток (как ростовую) среду используют с добавлением 5-10% коровьей или лошадиной сыворотки. Трипсин используется при получении культуры клеток для дезагрегации тканей, т.е. для разобщения клеток.

Среда Эндо (готовят непосредственно перед употреблением). К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70 °С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного раствора сульфата натрия. Дифференциально-диагностическая среда для культивирования бактерий кишечной группы.

Среда Плоскирева (бактоагар Ж) выпускается в сухом виде и содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Эта среда является не только дифференциально-диагностической, но и селективной, так как подавляет рост микроорганизмов (кишечная палочка и др.) и способствует лучшему росту некоторых патогенных бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерии). Лактозоотрицательные образуют на этой среде бесцветные колонии, лактозоположительные - красные.

Среда Левенштейна-Йенсена. Д ля приготовления этой среды в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина, растворяют: аспарагина 3,6 г, фосфата калия однозамещенного 2,4 г, сульфата магния 0,24 г, цитрата магния 0,6 г, картофельной муки 5 г, малахитового зеленого 0,4 г. Полученную смесь стерилизуют 15 мин при 120 °С. Приготовляют 1000 мл однородной суспензии из свежих яиц. Добавляют стерильно в яичную взвесь основной солевой раствор, подогретый до 45-60°С, тщательно перемешивают, избегая появления пузырьков воздуха, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки и оставляют для свертывания в наклонном положении при 85°С 45 мин.

Желточно - солевой агар (ЖСА) содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что обеспечивает элективность среды. Среда позволяет дифференцировать стафилококки, продуцирующие лецитиназу, от стафилококков, не выделяющих данный фермент, по образованию зон помутнения с перламутровым оттенком вокруг колоний лецитиназоположительных видов. Готовят среду из питательного солевого агара. В расплавленный и остуженный до 45 ⁰С агар добавляется куриный желток.

Питание микробов

Органов питания нет. Питательные вещества поступают через всю поверхность клетки. Для питания нужны: кислород, азот, углерод, водород. Кислород и водород микробы берут из воздуха и воды. По источникам азота и углерода микробы делятся на:

- аутотрофы,

- гетеротрофы.

Аутотрофы – (литотрофы) – “auto” - своя, сам, “trophika”– питание (“самопитающиеся”). Это микробы, которые усваивают азот и углерод из воздуха или неорганических веществ. Они имеют много ферментов, поэтому способны сами синтезировать органические вещества из неорганических, для этого они используют солнечную энергию - фотосинтетики и химические вещества – хемосинтетики. Это сапрофитные микроорганизмы.

Гетеротрофы – “getero” – другой, “trophika”– питание. Это микробы, которые азот и углерод берут из органических веществ. Они делятся на 2 группы:

– используют органические соединения мертвого субстрата (сапрофиты);

– используют органические соединения организма-хозяина (паразиты).

Дата добавления: 2014-12-07