Техника фаготипирования бактерии

Определение спектра чувствительности бактерий к фагу.

Спектр литического действия фага – это способность бактериофага заражать и вызывать лизис определенного круга бактерий. По наличию фагов, например, в воде, можно косвенно судить о присутствии в ней тех или иных бактерий-хозяев. Определение спектра литического действия используют при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных заболеваний. Исследование спектра литического действия фага может быть полезно при определении пути попадания данного фага на производство, а также при выборе способов придания клеткам признака фагоустойчивости.

Спектр литического действия фага можно охарактеризовать по индексу чувствительности культур – доле бактериальных культур,лизирующихся данным фагом,по отношению к общему числу испытанных штаммов. Этим показателем можно пользоваться при сравнении спектров литического действия нескольких фагов.

Определить спектр литического действия можно несколькими способами:

Способ 1:

На поверхность 1,5%-ой агаризованной питательной среды в чашке Петри с помощью бактериологической петли наносят культуры исследуемых бактерий медальонами. В центре каждого медальона с помощью пастеровской пипетки наносят каплю исследуемого фага. Чашки помещают в термостат с температурой 28ºС. Результаты учитывают через 24 часа. О способности тестируемого фага вызывать лизис исследуемых бактерий судят по наличию зон лизиса в местах нанесения суспензии фага.

Способ 2:

На поверхность 1,5%-ой агаризованной питательной среды в чашке Петри пипеткой наносят каплю исследуемого фага, втирают с помощью шпателя, затем наносят каплями исследуемые бактериальные культуры в стационарной фазе роста. Чашки помещают в термостат с температурой 28ºС. Результаты учитывают через 24 часа. О способности тестируемого фага вызывать лизис исследуемых бактерий судят по отсутствию роста чувствительных к исследуемому фагу бактерий.

Фаготuпuрованuе (определение фаготипа бактерий) - метод типи­рования бактерий, основанный на избирательной чувствительности оп­ределенных штаммов, или серотипов, бактерий внутри одного и того же вида к высокоспецифичным фагам.

Бактерии одного вида, различающиеся по набору рецепторов для строго специфи­ческих бактериофагов, разделяют на фаготипы (фаговары). На основании того, что взаимодействие бактерий и бактериофагов высокоспецифично, чувствительность бактерий к тем или иным фагам может служить признаком, пригодным для их идентификации.

Техника фаготипирования бактерий. Исследуемую культуру бакте­рий Е. сoli В засевают шпателем на поверхность 1,5%-й агаризованной питательной среды в чашки Петри для получения сплошного роста. На произведенный посев наносят по одной капле нескольких различных фагов, лизирующих определенные виды бактерий. После подсыхания капель чашки помещают в термостат и через 18-20 ч инкубирования регистрируют появление стерильных пятен в месте нане­сения фагов, указывающих, что клетки данной культуры чувствительны к исследуемому фагу.

Дата добавления: 2014-12-24