Определение мочевой кислоты в биологических жидкостях

Принцип метода: Мочевая кислота (МК) окисляется при каталитическом действии фермента уриказы с образованием аллантоина, СО₂ и Н₂О₂. Возникшую перекись водорода, концентрация которой пропорциональна уровню МК, определяют по образованию окрашенных продуктов окисления 4-аминоантипирина в реакции, катализируемой пероксидазой.

Порядок выполнения работы:

Реактивы	Калибровочная проба	Опытная проба
Рабочий реагент (ферменты, хромогены, буфер)	1 мл	1 мл
Калибровочный раствор МК (500 мкмоль/л)	0,025 мл	-
Кровь (сыворотка, плазма) Моча(разведение 1:5)	-	0,025 мл

Пробы перемешать, выдержать 10 минут при 37^о С и измерить оптическую плотность на ФЭКе против рабочего реагента (длина волны 520-550 нм).

Расчет:

Содержание МК в сыворотке крови (плазме) рассчитывают по формуле:

Е_опыт

С = ------ × 500, где 500 – содержание МК в калибровочном растворе (мкмоль/л)

Е_калиб

Содержание МК в суточной моче рассчитывают по формуле:

Е_опыт ×500 ×5 × V

С = --------------------------,

Е_калиб × 1000

где 500 – содержание МК в калибровочном растворе (мкмоль/л)

5 - коэффициент разведения мочи

1000 – коэффициент прерасчета мкмоль в моль

V - суточный диурез (♂- 1,5 л, ♀ - 1,2 л, дети – 1 л)

Нормальные значения:

Экскреция мочевой кислоты: 1,6 – 3,54 ммоль/сут (270 – 600 мг/сут)

Концентрация в крови: ♂ - 0,24 – 0,50 ммоль/л

♀ - 0,16 – 0,44 ммоль/л

Клинико-диагностическое значениеопределения мочевой кислоты и уратов

в биологических жидкостях:

Гиперурикемия – повышение концентрации мочевой кислоты в крови

Гиперурикурия – увеличение выделения мочевой кислоты с мочой (урикозурия)

Гипоурикурия -уменьшение выделения мочевой кислоты с мочой

Возможные причины гиперурикемии:

Первичные гиперурикемии (обусловлены энзимодефектами): подагра, синдром Леш-Нихана

Вторичные гиперурикемии (обусловлены иными причинами): алиментарные (пищевые), нарушение экскреции мочевой кислоты при поражении почек, усиление катаболизма (распада) собственных нуклеопротеинов тканей

Возможные варианты изменения концентрации мочевой кислоты в крови и моче:

Гиперурикемия Гипоурикурия	Подагра (во время приступа) Поражение почек (острый и хронический нефрит)
Гиперурикемия Гиперурикурия	Избыточное потребление нуклеопротеинов с пищей (мясо, икра и др.) Катаболизм собственных нуклеопротеинов (лейкоз, лучевая болезнь, гемолиз, злокачественный рост, лечение цитолитиками и цитостатиками, артрит, диабет, голодание, аллергия, гипоксия и др.)
Гипоурикемия Гипоурикурия	Прием иодистого калия, хинина, атропина, прогрессирующая мышечная дистрофия

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.

1. Антибиотик азасерин – структурный аналог глутамина, является мощным ингибитором синтеза пуриновых нуклеотидов и применяется в химиотерапии опухолей. Зная происхождение атомов гетероциклического кольца пурина, определите, какие этапы метаболизма инозинмонофосфата (ИМФ) будут ингибированы при введении азасерина

2. Изучение регуляции синтеза пуриновых нуклеотидов в эксперименте показало, что избыток АМФ и ГМФ тормозит синтез ИМФ – предшественника этих нуклеотидов за счет ингибирования одного из ферментов. Каков механизм регуляции?

А. Конкурентное ингибирование

В. Фосфорилирование-дефосфорилирование

С. Аллостерическая регуляция по принципу обратной связи

Д. Частичный протеоліз

Е. Неконкурентное ингибирование

Дата добавления: 2014-12-27