Лабораторная работа 7. Обнаружение тирозиназы в картофеле

Описание работы

Приборы и материалы

Электроплитка

Водяная баня

Термостат

Печень

Дистиллированная вода

Фосфатный буфер (pH 6,8)

Раствор янтарной кислоты 0,01 н

Метиленовый синий 0,05 %

Вазелиновое масло

В две пробирки (опытную и контрольную) помещают 2 мл отмытой измельченной говяжьей печени и добавляет дистиллированной воды. Содержимое контрольной пробы кипятят и охлаждают. В обе пробирки наливают по 1 мл фосфатного буфера рН 6,8; по 2 мл 0,01 н нейтрализованного раствора янтарной кислоты и по 2 капли 0,05 % раствора метиленового синего. Для создания анаэробных условий заливают содержимое пробирок 1 мл вазелинового масла. Пробирки помещают при температуре 30°С в термостат. Опыт считают законченным, когда в опытной пробирке жидкость будет почти бесцветной. В контрольной пробе жидкость не изменяет окраску, поскольку фермент денатурируется при нагревании.

Фермент тирозиназа так же, как сукцинатдегидрогеназа, относится к классу оксидоредуктаз (НФ 1.14.18.1). По механизму действия тирозиназа является оксигеназой, т.е. фермент катализирует реакцию прямого включения кислорода в состав молекулы субстрата. Тирозиназа является монооксигеназой, так как происходит включение в состав тирозина только одного атома кислорода.

По химической природе тирозиназа является металлопротеидом, содержащим медь в количестве 0,2-0,25 %. Медь служит переносчиком электронов от субстрата на кислород воздуха. Тирозиназа содержится во многих растениях, грибах, а также в отдельных органах и тканях животных.

Под влиянием фермента тирозиназы окисление тирозина приво­дит к образованию окрашенных соединений хиноидного типа. Тирозин сначала окисляется до диоксифенилаланина (ДОФА), а затем – до ДОФА-хинона.

Последующие превращения протекают и в отсутствие тирозиназы, под действием кислорода воздуха и приводят к образованию меланинов.

1 Цель работы – определить активность тирозиназы

Дата добавления: 2015-04-24