Построение калибровочной кривой для определения неорганического фосфата

Определение неорганического фосфора

Из каждой пробы отмеривают по 0,2 мл безбелкового фильтрата в пронумерованную пробирку, добавляют 1,8 мл дистиллированной воды, затем 1,6 мл реактива А (раствор молибдата аммония в серной кислоте), хорошо перемешивают, добавляют 0,4 мл реак­тива В (аскорбиновая кислота в кислом растворе хлористого олова) и сразу же быстро перемешивают. Для развития окраски пробы оставляют при комнатной температуре на 30 мин и фотометрируют при 720 нм против контроля.

Расчет содержания неорганического фосфата в исследуемых пробах ведут по калибровочной кривой.

Для построения калибровочной кривой готовят раствор калия фосфорно-кислого однозамещенного, в 1 мл которого содержится 6,2 мкг фосфора.

Заполнение проб проводят по следующей схеме (табл. 5). Интенсивность окраски измеряют на ФЭКе против контроля. По полученным данным строят калибровочную кривую.

На оси абсцисс откладывают количество мкг фосфора в пробе n, на оси ординат - соответствующее значение оптической плотности Д720.

Таблица 5 – Схема приготовления проб для построения градуировочной кривой

№ пробы	Количество фосфора в пробе, мкг	Рабочий раствор фосфора, мл	Вода	Реактив А, мл	Реактив В, мл
	0,62	0,1	1,9	1,6	0,4
	1,24	0,2	1,8	1,6	0,4
	1,86	0,3	1,7	1,6	0,4
	2,48	0,4	1,6	1,6	0,4
	3,10	0,5	1,5	1,6	0,4
	3,72	0,6	1,4	1,6	0,4
	4,34	0,7	1,3	1,6	0,4
	4,96	0,8	1,2	1,6	0,4
	5,56	0,9	1,1	1,6	0,4
	6,20	1,0	1,0	1,6	0,4

В конце работы рассчитывают скорость потребления фосфата в расчете на 1 г сухих дрожжей по формуле:

,

где:

а - количество фосфата в инкубационной среде до брожения, мкг (проба № 1);

в - количество фосфата в инкубационной среде через различные промежутки времени в процессе брожения, мкг;

t - время брожения, ч;

0,2 - объем безбелкового фильтрата, взятого для определения фосфата, мл;

2 и 15 - разбавления инкубационной среды в ходе анализа;

s - количество сухих дрожжей взятых для брожения, г.

Дата добавления: 2015-04-24