Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина

Хромопротеины.

Реакция с дифениламином.

Выделение дезоксирибонуклеопротеинов из селезенки.

Нуклеопротеины

Дезоксирибонуклеопротеины (ДНП) выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами (зобная железа, селезенка, сперматозоиды). ДНП растворяются в растворах солей средней концентрации, например в хлориде натрия (1 М), и снова осаждаются при разведении последних (до 0,15 М) в виде волокнистого нуклеопротеина.

В ступке растирают 5 г селезенки с равным количеством песка, добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора хлорида натрия, а затем постепенно небольшими порциями 25 мл охлажденного 1 М раствора хлорида натрия. Растирание продолжают 10-15 мин в ступке, охлаждаемой льдом. Полученную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин. Измеряют объем центрифугата и вливают его в шестикратный объем воды тонкой струей, медленно размешивая жидкость деревянной палочкой. Нуклеопротеин в виде нитей наматывается на палочку.

Если выделился хлопьевидный осадок, то ему дают отстояться, а остаток жидкости подвергают центрифугированию.

Дезоксирибонуклеиновую кислоту обнаруживают по ее реакции с дифениламином. В пробирку переносят немного осадка ДНК и растворяют его в 1-2 мл 0,4%-ного раствора гидроксида натрия. К раствору добавляют равный объем раствора дифениламина и смесь нагревают в кипящей водяной бане около 10-15 мин. Появляется синее окрашивание раствора.

Представителем хромопротеинов является белок эритроцитов крови млекопитающих гемоглобин. Его белковой частью глобин, а небелковой – гем (протопорфирин, пиррольные кольца которого связаны с атомом железа).

В пробирку наливают 0,5 мл сильно разведенной крови и кипятят несколько минут, затем охлаждют. Добавляют 0,5 мл раствора бензидина и несколько капель 3% раствора пероксида водорода. Появляется зеленая, переходящая в синюю окраска. При действии на гемоглобин концентрированной уксусной кислоты гем переходит в гемин, который и катализирует окисление бензидина пероксидом водорода.

Бензидиновая проба применяется при клинических и судебно-медицинских исследованиях для обнаружения минимальных количеств крови в биологических объектах.

Контрольные вопросы

1. Перечислите функции хромопротеинов в организме.

2. Укажите строение белковой части гемоглобина.

3. Почему гемоглобин зародыша и ребенка обладает разным сродством к кислороду?

4. После пожара обнаружен труп. Каким простым способом можно определить, погиб ли человек во время пожара или он умер до пожара?

5. Охарактеризуйте химический состав нуклеопротеинов и их функции в организме.

6. Что лучше растворяется в воде: нуклеиновые кислоты или нуклеопротеины? Почему?

Дата добавления: 2015-03-29