Сопоставление редокс-потенциалов рибовлавина и метиленового синего

Обнаружение дегидрогеназы (ксантиноксидаза, альдегиддегидрогеназа, КФ 1.1.3.22) в молоке (реакция Шардингера).

Работа 7. Оксидоредуктазы

В три пробирки наливают по 2 мл свежего коровьего молока. Одну пробу кипятят в течение 2 - 3 мин и охлаждают. В прокипяченную пробу и в одну из некипяченых проб добавляют по 0,5 мл 0,4%-ного раствора формальдегида, а в другую некипяченую - 0,5 мл воды. Затем во все три пробирки приливают по 2 капли 0,01%-ного раствора метиленового синего. Содержимое пробирок перемешивают и заливают в каждую по 3-4 капли вазелинового масла. Все пробы помещают в водяную баню при 40°С. Через некоторое время жидкость в некипяченой пробе, содержащей субстрат, обесцвечивается за счет образования восстановленной формы метиленового синего:

Если бесцветный раствор метиленового синего встряхнуть на воздухе, то он вновь приобретает синий цвет:

Эту реакцию можно использовать для отличия сырого молока от кипяченого.

Редокс-потенциалы являются мерой способности молекул обмениваться электронами. Вещество с большим окислительно-восстановительным потенциалом окисляет вещество с меньшим окислительно-восстановительным потенциалом. Для метиленового синего (±2 е) Е'_о составляет +0,011 В, у НАД+ (±2 е) - 0,320 В, у рибофлавина (±2 е) - 0,208 В, у цитохрома с (±е) + 0,260 В. Сравнивая стандартные редокс-потенциалы этих систем, можно заключить, что метиленовый синий пригоден для выявления восстановленных форм никотинамидных и флавиновых оксидоредуктаз.

В пробирку наливают 5 - 6 капель воды, 1 каплю раствора рибофлавина и добавляют по каплям раствор метиленового синего до появления зеленовато-синего окрашивания смеси. Бросают в окрашенную смесь кусочек цинка и капают 1 каплю конц. соляной кислоты. Выделяется водород, происходит восстановление метиленового синего и рибофлавина. Восстановление первого из них происходит быстрее, поэтому цвет смеси становится сначала зеленым, затем зеленовато-желтым и наконец бледно-желтым или розоватым. Жидкость сливают в другую пробирку и наблюдают за изменением цвета. Восстановленная форма рибофлавина через метиленовый синий передает электроны и ионы водорода на кислород воздуха и раствор желтеет. После этого происходит окисление лейкометиленового синего, и содержимое пробирки меняет цвет через зеленый в синий.

Дата добавления: 2015-03-29