Методы исследования в гистологии

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СМ и ЭМ

Округлая клетка

Клетки ото­двигаются друг от друга

У нее появляется

разделительная

борозда

Но узкий

межклеточный мостик сохраняется до разделения

1.2

признак	световой микроскоп	электронный микроскоп
освещение	свет (солнца, эл.лампы)	пучок электронов
линзы	оптические (стекло)	электромаг­нитные катушки
увеличение	до х 1,000	от 1,000(о6ычн о до 100.000 раз)
разрешение	200 нм	0.2 нм
цвет изображения	зависит от окраски	черно-белый

Гистохимия - это метод окраски тканей, выявляющий наличие и локализацию в клетках или межклеточном матриксе определенных макромолекул (биохимия выявляет лишь наличие и количество веществ, но не локализацию). При окраске срезов образуется цветной продукт, который выявляется световым микроскопом. Например, нуклеиновые кислоты можно выявить реакцией Фельгена (окраска галлоцианином-хромовыми квасцами, ДНК и РНК окрашиваются в темно-красный цвет), липиды '- Суданом III (желтый цвет) или серебрением (осмированием) - черный цвет.

Если до окраски по Фельгену обработать срез ферментом ДНКаза, расщепляющим ДНК, то после окраски окрашенными будут лишь РНК. Если обработать срез РНК-азой, то окраска будет обусловлена присутствием только ДНК. Такая предварительная обработка дает контроль гистохимических реакций.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ

Разновидность гистохимии - гистоэнзимология -устанавливает локализацию ферментов (энзимов) в структурах тканей (кислая фосфатаза «метит» лизосомы, ацетилхолинэстераза - нервную ткань -(используется для диагностики болезни Гиршпрунга.

Количественная гистохимия с помощью

фотометрии, денситометрии позволяет оценить количественно наличие веществ в структурах.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ. ^{1 2}

Ф Иммуногистохимия - более чувствительный и специфичный метод, чем рутинная гистохимия, где любая макромолекула (антиген)может быть выявлена с помощью антител.

• Например, лимфоциты T-хелперы имеют на поверхности антигенный маркер CD4+. Если обработать срез антиС04+антителами, связанными с флюоресцирующим красителем (флюоресцином, например), то по свечению в люминисцентном микроскопе можно выявить все Т-хелперы, присутствующие на срезе.

• Описанный метод - это прямой иммуногистохимический метод. При непрямом методе флюоресцирующей меткой метят не первичное антитело, а вторичное антитело, которое является антителом к комплексу антиген-первичное антитело. Непрямой метод является более чувствительным.

• Иммуногистохимия (так же как и рутинная гистохимия) применима как на уровне светового, так и электронного микроскопа.

Тимус, гистологический препарат,

окраска антиС08+антителами

(непрямой метод иммуногистохимии)

Щ!*'.!^ * *- £. -«г* ч!&

Т-супрессоры (клетки, экспрессирующие на поверхности антиген CD8+), имеют на поверхности темный ободок.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ. '

# Техника замораживания-скалывания: быстро замороженная в криоконсервантах ткань режется сверх-охлажденным лезвием - но ткань не режется, а ломается в местах наименьшего молекулярного связыввания, например между наружным и внутренним листком биомембран. Затем на поверхность скола напыляется металл, и реплика просматривается в электронном микроскопе.

# Конфокальный лазерный микроскоп (световой) - позволяет независимо от толщины среза получить контрастное изображение и провести пространственную реконструкцию тканей. Лазерный луч сам производит оптический срез ткани на любом уровне. Это разновидность люминисцентной микроскопии.

# Морфометрия - метод количественной оценки изображения (определении площади, периметра, ровности контуров и проч.)

Дата добавления: 2015-04-30