Теоретичні відомості. Тема: Розділення амінокислот методом ТШХ на силуфолових пластинках

Тема: Розділення амінокислот методом ТШХ на силуфолових пластинках

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА №1

ІІІ. Вимоги безпеки у аварійних ситуаціях

ІІ. Вимоги безпеки після закінчення роботи

1. Прибирання робочих місць після закінчення практичних занять виконуйте за вказівкою викладача або лаборанта.

2. Не виливайте в каналізацію залишки кислот, лугів, органічних та інших розчинів. Зливайте їх у банки і склянки, спеціально призначені для цього.

3. Після закінчення роботи помийте руки з милом, зніміть халат.

1.У випадку, коли розбився прилад, склянка з агресивною рідиною, розлита значна кількість органічних розчинників (більш ніж 0,05 л), і починають виділятися отруйні гази і пара, треба негайно вимкнути всі електричні прилади, відчинити вікна, вийти з приміщення і зачинити двері. Ліквідація наслідків в даній ситуації проводиться в засобах індивідуального захисту (халат, гумові рукавиці, респіратори, протигази).

2. У випадку необережного поводження з лугами слід негайно змити їх залишки зі шкіри водою або слабким розчином борної кислоти.

У разі потрапляння на шкіру кислоти негайно змити їїслабким розчином питної соди.

У разі потрапляння в очі будь-якої речовини негайно промийте їх великою кількістю води. Після цього у разі потрапляння в очі кислоти накладіть ватний тампон, змочений розчином натрій гідрокарбонату з масовою часткою 3 %, у разі потрапляння лугу - промийте додатково розчином борної кислоти (1 чайна ложка борної кислоти на склянку води).

3.У разі виникнення загорання необхідно:

- повідомити викладача або лаборанта;

- повідомити пожежну охорону по телефону "101";

- зачинити вікна і двері, щоб уникнути поширення до сусідніх приміщень;

- вимкнути електромережу;

- приступити до ліквідації осередка вогню.

(4 години)

Мета роботи: Вивчити хроматографічний метод роз­ділення амінокислот з використанням розподільної хроматографії на силуфолових пластинках.

Хроматографія (хромо — колір, графо — пишу) це фізико-хімічний метод розділення рідких та газоподібних сумішей на складові.

Хроматографічний метод, описаний вперше М.С. Цвєтом у 1903 р., широко використовується в біохімії, мікробіології, а також у промисловості для одержання, очи­стки та ідентифікації органічних та неорганічних сполук. Він дає змогу розді­ляти та аналізувати складні суміші речовин, очищати їх від домі­шок, концентрувати та ідентифікувати речовини.

Всі хроматографічні системи складаються, як правило, з двох фаз: нерухомої, яка може бути твердою або рідкою, та рухомої, яка рухається по нерухомій фазі. Рухома фаза, в потоці якої переміщується суміш, що розподіляється, називається елюентом, а розчин, який виходить з шару нерухомої фази та містить розчинені компоненти суміші – елюатом.

Поведінка молекул в хроматографічних процесах визначається будовою та характером хімічних зв¢язків між окремими атомами та групами, взаємодією частинок речовини що розділяється і фази, з якою ці частинки стикаються.

Хроматографічні методи класифікують за такими ознаками:

1. За агрегатним станом — газова, рідинна, газорідинна хроматографія;

2. За механізмом розділення — адсорбційна, іонообмін­на, розподільна хроматографія.

3. За формою проведення процесу — колоночна, капілярна, площинна (паперова і хроматографія в тонкому шарі ХТШ).

Для характеристики поведінки зон речовин, що хроматографуються у паперовій хроматографії вводять величину хроматографічної рухомості R_f:

Хроматографічна рухомість (R_f) речовини в даній системі розчинників характеризується відношенням:

- відстані між стартом (точкою нанесення речовини на хроматограму) та положенням максимума концентрації в плямі речовини на хроматограмі до відстані, що пройшов розчинник від лінії старту до лінії фінішу (відповідає положенню фронту рідини, зупиненому на певній відстані від краю пластинки).

l (шлях, пройдений розчиненим компонентом від старту до центру плями)

R_f = -------------------------------------------------------------------------------------------, де

L (шлях, пройдений фронтом розчинника від старут до фінішу)

l -шлях, пройдений розчиненим компонентом від старту до центру

плями;

L -шлях, пройдений фронтом розчинника від старут до фінішу.

Рис. 1.1. В изначення R_f компонентів суміші:

На величину R_f впливає наявність в речовині функціональних груп

(-СООН, -ОН, -NН₂, -NO₂, -H, -Cl), водневі зв¢язки всередині молекули в молукулі амінокислоти, що знижують розчинність речовин в воді та полярних розчинниках, температура плавлення, електролітична дисоціація, здатність до утворення комплексних сполук, рН рухомої фази та ін.

Розподільна хроматографія в тонкому шарі (ТШХ).

У цьому методі хроматографія відбувається в тонкому шарі сорбенту нанесеному на тверду інертну пластинку. Найбільшого поширення набули пластинки з підкладкою виготовлену з алюмінієвої фольги або полімеру. Частіше всього адсорбентом може бути сілікагель, оксид алюмінію, целюлоза, поліамід та ін. Для більш міцного закріплення адсорбента на жорсткій пластині-підложці використовують реагенти для зв¢язування (гіпс, крохмаль, силіказоль та ін.). Суміш адсорбента з цим реагентом наносять на підложку дуже тонким слоєм (біля 100 мкм).

Ми користуємося цим видом хроматографії для визначення амінокислот в суміші, що наноситься на силуфолову пластинку. В якості рухомої фази використовується суміш розчинників н-бутанол - оцтова кислота - вода у співвідношенні (4:1:5).

Самостійна робота студентів

1. Ознайомитися з правилами роботи в лабораторії та технікою безпеки.

2. Підготувати силуфолову пластинку до хроматографії (відмітити лінію старту та точки 1, 2, 3, 4). Підписати.

3. Нанести розчини відомих амінокислот на точки 1, 2, 3 та розчин суміші невідомих амінокислот на точку 4.

4. Розмістити пластинку в камері з розчинником.

5. Записати час початку і закінчення хроматографії.

6. Визначити тривалість хроматографії.

7. Висушити хроматограму.

8. Проявити хроматограму.

9. Ідентифікувати плями амінокислот виявлені на силуфоловій пластинці та обвести кожну пляму олівцем.

10. Визначити амінокислоти, що входили до складу невідомої суміші.

11. Вирахувати хроматографічну рухомість (R_f) окремих плям

амінокислот.

12. Зробити висновок (написати назву ідентифікованих амінокислот

невідомої суміші, визначити R_f кожної амінокислоти невідомої суміші, час хроматографії).

Дата добавления: 2015-05-23