Выявление клеточных границ и тонофибрилл раствором водный голубой — орсеин — эозин по Унне

Метод выявления в эпидермисе межклеточных мостиков по Воронину.

Окраска пикроиндигокармином.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ КОЖИ И ЕЕ ПРОИЗВОДНЫХ

Окраска азаном. Эта окраска применяется для изучения общей морфологии кожи и кожных желез.

Приготовление растворов. 1. Квасцовый кармин. В 200 мл дистиллированной воды растворяют при нагревании 10 г калийных квасцов и затем 1 г карминовой кислоты. После охлаждения фильтруют и прибавляют для предохранения от плесени 1 мл формалина.

2. Пикроиндигокармин (по Краузе). 1,0 г индигокармина растворяют в 300 мл концентрированного раствора пикриновой кислоты.

Методика окрашивания: 1) срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор квасцового кармина; 2) промывают их 2—3 мин в дистиллированной воде; 3) переносят на 5—10 мин в раствор пикроиндигокармина; 4) промывают в 70% спирте; 5) проводят через 96% спирт, абсолютный спирт, ксилол, заключают в бальзам.

Результаты: ядра красные, соединительная ткань ярко-синяя, цитоплазма клеток и мышечная ткань травянисто-зеленые.

Приготовление растворов. 1. 1% раствор осмиевой кислоты (четырехокиси осмия). Навески осмиевой кислоты около 1 г хранятся в запаянных стеклянных трубочках. Трубочку подпиливают напильником, затем отламывают верхнюю часть, не содержащую кристаллов осмиевой кислоты. Кристаллы вытряхивают в мерную колбочку и туда же бросают трубочку с приставшими к ней остатками реактива. Подливают дважды дистиллированную воду в объеме, необходимом для получения 1% раствора осмиевой кислоты (если в трубочке было не 1,0 г, а, например, 1,3 г осмиевой кислоты, приливают не 100 мл, а 130 мл дистиллированной воды). Посуда должна быть абсолютно чистой, так как органические примеси и пыль вызывают восстановление осмиевой кислоты (потемнение раствора). Можно вместо дистиллированной воды использовать 0,1% раствор хромовой кислоты, в которой восстановления осмиевой кислоты не происходит, и раствор годами остается прозрачным.

2. Насыщенный раствор танина.

Методика окрашивания: 1) протравливают срезы в 1% растворе осмиевой кислоты в течение 10 мин; 2) переносят в раствор танина на 10 мин; 3) помещают в 1% осмиевую кислоту на 20 мин; 4) проводят через абсолютный спирт, ксилол, заключают в бальзам.

Результат: межклеточные мостики темнеют.

Приготовление растворов. 1. Раствор сафранина:

1.0 г сафранина О подогревают с 30 мл 96% спирта в колбе на водяной бане; после растворения красителя добавляют 70 мл дистиллированной воды и фильтруют.

2. Раствор водный голубой — орсеин — эозин приготовляют соединением двух отдельно составляемых растворов: раствора А и раствора Б. Раствор А: 1,0 г водного голубого растворяют в 100 мл дистиллированной воды, а 1,0 г орсеина — в 50 мл 96% спирта; после полного растворения красителей оба раствора соединяют и добавляют 20 мл глицерина и 5 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор Б: 1.0 г эозина (растворимого в спирте) растворяют в 80 мл абсолютного спирта. Для окрашивания смешивают 10 частей раствора А с 3 частями раствора Б.

Методика окрашивания: 1) депарафинированные срезы материала, фиксированного по Буэну в спирт-формалине или просто в формалине, помещают на 10 мин в раствор водный голубой — орсеин — эозин; 2) быстро ополаскивают дистиллированной водой; 3) окрашивают в растворе сафранина 10 мин; 4) ополаскивают дистиллированной водой; 5) погружают в 0,5 % раствор бихромата калия на 10—15 с; 6) ополаскивают в дистиллированной воде; 7) дифференцируют и обезвоживают абсолютным спиртом, обесцвечивают ксилолом, заключают в бальзам.

Результаты: ядра красноватые, цитоплазма синевато-фиолетовая, коллагеновые волокна синие, эластические — коричнево-красные, тонофибриллы — фиолетовые.

Дата добавления: 2015-05-10