Окраска мазков из аспирата полости матки по Папаниколау

Окраска мазков аспирата полости матки по Папаниколау может выполняться ручным и автоматическим способами.

При взятии биологического материала следует соблюдать следующее:

- биологический материал после получения сразу же наносится на предметное стекло и фиксируется;

- фиксация проводится 96% этиловым спиртом или специальными цитологическими фиксаторами.

Доставка и регистрации материала проводится по правилам, описанным в тексте настоящего стандарта (см пункт).

Окраска мазков проводится готовыми красителями Папаниколау (EA 50, EA65). Состав красителя EA 50 приведен в таблице 3.

Таблица Б 3 - Состав красителя ЕА 50 (по Папаниколау)

№	Реактивы	EA 50
1.	Световой зеленый SF (0,5 % спиртовой раствор)	45 мл
2.	Бисмарк коричневый (0,5 % спиртовой раствор)	10 мл
3.	Эозин Y (0,5 % спиртовой раствор)	45 мл
4.	Фосфорно-вольфрамовая кислота	200мг
5.	Уксуснокислый литий (насыщенный раствор)	1 капля

Последовательность процедур при ручном окрашивании мазков:

1.
Поэтапная регидратация (насыщение водой) цитологических препаратов спиртах нисходящей крепости: 80%, 70%, 50%, дистиллированной воде. Время воздействия каждого раствора 30 сек.

2.
Окрашивание мазков гематоксилином в течение10 мин.

3.
Мазки промываются водопроводной водой до появления синей окраски.

4.
Дегидратация в спиртах восходящей крепости: 50%,70%,80%.. Время воздействия каждого раствора 30 сек.

5.
Окрашивание мазков оранжевым G в течение 30 – 100 секунд.

6.
Трехкратное промывание в 95 % растворе этилового спирта.

7.
Окрашивание раствором красителя EA 50 в течение 1,5 минут.

8.
Трехкратное промывание в 95 % растворе этилового спирта.

9.
Двукратное поэтапное обезвоживание в растворах: 100 % этилового спирта;

этилового спирта и ксилола в пропорции 1:1; ксилоле.

10.
Заключение препарата синтетическим бальзамом с покровным стеклом.

Микроскопическое изучение препарата проводится по правилам, приведенным в тексте документа п.6.4.

Автоматическое окрашивание препаратов способом Папаниколау проводится с помощью автоматов, средняя производительность которых - окраска 124 препаратов в течение 30 минут. Качество окрашивания не уступает ручным методам.

Библиография

1. ГОСТ Р ИСО 15189 ¾ 2009. Лаборатории медицинские. Специальные требова­ния к качеству и компетентности

2. ГОСТ Р 52905 ¾ 2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности

3. Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения, МЗ РФ №МУ-287-113 от30.12.1998 г.;

4. Безопасность работы с микроорганизмами 111 -1У групп патогенности и гельминтами., СП 1.2.731-99.

5. ГОСТ Р 53079.4―2008 Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4 Правила ведения преаналитического этапа

Проект стандарта подготовили:

Богатырев В.Н., Петрова А.С., Соколова В.К., Чистякова О.В. – Российский онкологический научный центр им.Н.Н.Блохина РАМН;

Меньшиков В.В., Кадашева О.Г. – Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова;

Полонская Н.Ю. – Централизованная многопрофильная межрайонная клинико-диагностическая лаборатория при поликлинике № 117 г. Москвы;

Юрасова И.В. – Центральная клиническая больница гражданской авиации (г. Москва).

1 Взятие образца аспирата из полости матки проводится клиническим персоналом (врачами – гинекологами или акушерами) по месту лечения и обследования пациентки

2 На 1 предметное стекло по норме расхода спирта полагается 2 г этанола

3 Форма № 203/у -02 «Направление на цитологическое диагностическое исследование и результат исследования», утверждена приказом Минздрава России от 24.04. 2003 г. № 174.

4 Все фиксаторы содержат метанол, что требует соблюдения соответствующих правил обращения с химическими реагентами, содержащими ядовитые вещества

5 Раздел подготовлен канд. мед. наук Юрасовой И.В. и доктором мед. наук Полонской Н.Ю.

6 Повторно используемые предметные стекла хранят в смеси Никифорова. Перед приготовлением мазков, стекла извлекают из раствора и протирают насухо.

Тема: Отдельные аспекты распространенности папиломавирусной инфекции среди пациенток обратившихся в женскую консультацию. Состав высокоонкогенной группы и сочетание с другими инфекционными агентами в ассоциате.

проф. воробьева Л. И.,Неймарк С. Л., Бакшеев С. Н.

Цель исследования: Получение обьективных данных о распространенности папиломавирусной инфекции. Встречаемость отдельных типов вируса папимомы человека в праймере высокоонкогенной группы. Участие HPV в микробно-вирусно-протозойных ассоциатах, обуславливающих патологический процесс на шейке матки.

Материалы и методи: Обследовано 120 пациенток обратившихся в женскую консультацию. Каждая пациентка была обследована по стандартной методике включающей:

-осмотр влагалища и шейки матки при помощи кольпоскопа,

- цитологическое исследование клеток из цервикального канала и шейки матки,

- цитоморфологическое исследавание из трех точек.

Исследования по HPV проводились по методу ПЦР групповым праймером (high risk 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 59, 52, 56, 58, 66), с последующим типированием отдельных вирусов из этого праймера.

Методом ПЦР так же, пациентки были обследованы на Tr.vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, хламидийную инфекцию.

Культуральными методами продублирована Tr.vaginalis, Neisseria gonorrhoeae в двух разных лабораториях. Для диагностики микоуреаплазменной инфекции применен метод DUO.

Результаты:

В результате из 120 обследованных, более чем у половины выявлены те или иные комбинации HPV из высокоонкогенной группы. HPV-положительные пациентки составили 54% от обследованных. В результате типирования получены данные о встречаемости отдельных вирусов из данного высокоонкогенного праймера (high risk 16,18, 31, 33, 35, 39, 45, 59, 52, 56, 58, 66) среди HPV-положительных.

Распределение вирусов по встречаемости:

Тип вируса	16	18	31	33	35	39	45	59	52	56	58	66
Количество случаев обнаружения вируса	18	12	2	7	2	5	3	1	3	31	1	5
Встречаемость отдельных типов вирусов в этом праймере	27,6%	18,4%	3%	10,7%	3%	7,6%	4,6%	1,5%	4,6%	47,6%	1,5%	7,6%

Так же определено количество вирусов из высокоонкогенного праймера среди HPV- положительных пациенток.

Один тип вируса	Два типа вируса	Три типа вируса	Четыре типа вируса
у 45 пациентов	У 15 пациенток	У 4 пациенток	У 1 пациентки
69%	23%	6,1%	1,5%

Таким образом наиболее распространненным типом папиломавируса из данного праймера являеться 56 тип (47%), далее 16 тип (27,6%) и 18 тип (18,4%).

Ни у одной пациентки папиломавирусная инфекция не встречалась изолировано. Ниже в таблице приведены данные о наличии других инфекций у пациенток с положительным HPV.

Инфекционный агент	Tr.vaginalis	Neisseria gonorrhoeae	Хламидийная ннфекция	Микоуреаплазма
Обнаружено в группе HPV-положительных	42 (64%)	6 (9,2%)	15 (23%)	51 (78%)

Встречаемость этих инфекций в группе HPV-положительных пациенток весьма высокая и превышает среднестатистическую в популяции.

Цитологические типы пациенток с положительным HPV.

Тип цитологии	Тип 1	Тип 2	Тип 3	а	б	в
Обнаружено в группе HPV-положительных	4 (6,1%)	54 (83%)	всего 7 (10,7%)	4	2	1

Результаты кольпоскопических исследований, оцениваемые согласно Международной классификации кольпоскопических терминов, укладывались в 90% в п.2. Ненормальные кольпоскопические образования.

Но встречались HPV-положительные пациентки с нормальной кольпоскопической картиной.

Дата добавления: 2015-05-10