Постоянная микрофлора полости рта

МИКРОФЛОРА ПОЛОСТИ РТА

ЛЕКЦИИ ПО КУРСУ МИКРОБИОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ ПОЛОСТИ РТА

В полости рта насчитывается около 160 видов микроорганизмов — это один из наиболее обсемененных отделов орга­низма человека.

Микроорганизмы попадают в полость рта с пищей, водой, из воздуха. Здесь имеются благоприятные условия для их развития: всегда равномерная влажность, довольно постоянная температура (около 37 °С), достаточное содержание кислорода, слабощелочная рН, обилие питательных веществ. Развитию микроорганизмов способствуют и анатомические особенности полости рта: наличие складок слизистой оболочки, межзубных промежутков, десневых карманов, в которых задерживаются остатки пищи и спущенный эпителий. Все это объясняет тот факт, что микробная флора полости рта не только обильна, но и разнообразна.

Микроорганизмы в полости рта распределяются неравно­мерно. В большом количестве они обнаруживаются на спинке языка и поверхности зубов. В 1 г зубного налета содержится около 300 миллиардов микробов, в слюне их меньше — около 900 миллионов в 1 мл.

Количество микроорганизмов в полости рта подвержено значительным колебаниям, однако видовой состав микрофло­ры (аутофлоры) у здоровых людей характеризуется известным постоянством.

П. В. Циклинская (1859—1923) предложила различать посто­янную (резидентную) и непостоянную микрофлору полости рта.

Резидентная микрофлора полости рта включает представите­лей всех классов микроорганизмов: бактерий, актиномицетов, спирохет, грибов, простейших, а также вирусов. Преобладают бактерии, причем около 90 % микробных видов составляют анаэробы.

Наиболее обширная группа бактерий, населяющих полость рта, кокковидные формы.

Стрептококки. Являются одними из основных обитателей полости рта. Обнаруживаются у 100 % людей в слюне (в 1 мл до 10⁸ — 10⁹ стрептококков) и в десневых карманах.

Стрептококки имеют шаровидную или овальную форму, грамположительны, неподвижны, не образуют спор. В мазках из культур на плотных средах располагаются попарно или короткими цепочками, в препаратах из бульонных культур — длинными цепочками и скоплениями.

По типу дыхания относятся к факультативным анаэробам, встречаются и облигатные анаэробы (Пептострептококки). Тем­пературные границы роста варьируют в зависимости от вида, оптимальная температура — около 37 "С.

На простых средах не растут или дают очень скудный рост. Для культивирования стрептококков к средам прибавляют кровь, сыворотку, асцитическую жидкость, глюкозу. Стрепто­кокки образуют мелкие (диаметром около 1 мм), полупрозрач­ные, сероватые или бесцветные колонии. В бульоне характе­рен придонно-пристеночный рост. На средах с кровью могут вызывать гемолиз эритроцитов. По характеру гемолиза делятся на три группы: 1) р-гемолитические — колонии окружены зоной полного гемолиза; 2) а-гемолитические (зеленящие) — вызы­вают частичный гемолиз вокруг колоний и дают зеленоватое окрашивание, обусловленное превращением гемоглобина в метгемоглобин; 3) у-стрептококки — не обладают гемолитической активностью.

Ферментируют углеводы с образованием почти исключи­тельно молочной кислоты, обусловливая молочнокислое бро­жение.

Благодаря этому являются сильными антагонистами по от­ношению ко многим гнилостным бактериям, встречающимся в полости рта.

Стрептококки продуцируют ряд экзотоксинов и ферментов агрессии (гемолизин, лейкоцидин, эритрогенный токсин, гиалуронидазу, стрептокиназу, О- и S-стрептолизины и др.).

Имеют сложную антигенную структуру. Известно 17 серо­логических групп стрептококков, обозначаемых заглавными латинскими буквами от А до S. В клеточной стенке находится группоспецифический полисахаридный С-антиген (гаптен), составляющий примерно 10 % сухой массы клетки.

Существуют стрептококки, не содержащие группового С-антигена и не принадлежащие поэтому ни к одной из 17 серологических групп. Стрептококки, не имеющие группоспецифического С-анти­гена, постоянно обнаруживаются в полости рта. Все они зе­ленящие или негемолитические, лишены таких признаков патогенности, как способность продуцировать стрептолизины, стрептокиназу. Однако именно эти стрептококки чаще всего являются причиной воспалительных процессов в по­лости рта.

Типичными представителями стрептококков, не имеющих группового С-антигена, являются S. salivarius и S. mitis, кото­рые в 100 % случаев обнаруживаются в полости рта. Харак­терной особенностью S. salivarius является образование кап­сулы как результат синтеза вязких полисахаридов из сахарозы. В местах наиболее частой локализации кариеса (в области фиссур, на проксимальных поверхностях зубов) обнаружива­ется S. mutans, трудно дифференцируемый от S. salivarius. Полагают, что S. mutans играет ведущую роль в возникнове­нии кариеса зубов.

Помимо стрептококков, лишенных группового антигена, в полости рта обнаруживаются представители почти всех 17 групп, но они встречаются менее постоянно и в значительно меньшем количестве.

Пептострептококки — облигатные анаэробы — являются постоянными обитателями полости рта. Различают 13 видов пептострептококков. Они играют большую роль при смешанной инфекции, так как усиливают патогенное действие других мик­роорганизмов.

Стафилококки. Обнаруживаются в слюне в 80% случаев, часто в зубодесневых карманах.

Клетки имеют сферическую форму, располагаются скоп­лениями, напоминающими грозди винограда (Staphylon — гроздь). Грамположительны, неподвижны, не образуют спор. -

Растут при температуре от 7 до 46 °С, температурный опти­мум 35 — 40 "С. Факультативные анаэробы. Неприхотливы, хо­рошо растут на простых питательных средах, образуя колонии средних размеров, круглые, гладкие, выпуклые, различных от­тенков желтого или белого цвета (в зависимости от проду­цируемого пигмента). На жидких средах дают равномерное помутнение.

Обладают выраженной ферментативной активностью. Сбраживают многие углеводы с образованием кислоты. Расщепляют белки с выделением сероводорода. Индол не образуют.

По современной классификации род Staphylococcus разде­лен на три вида:

1) S. aureus;

2) S. epidermidis;

3) S. saprophyticus.

Золотистые стафилококки (S. aureus) обладают рядом при­знаков патогенности. В отличие от других видов стафилококка они коагулируют цитратную плазму и ферментируют маннит в анаэробных условиях.

В полости рта здоровых людей (на деснах, в зубном налете) обнаруживаются преимущественно S. epidermidis. У некото­рых лиц в полости рта могут присутствовать и золотистые ста­филококки. Однако значительно чаще S. aureus локализуются, на слизистой оболочке передних отделов полости носа и сли­зистой глотки, обусловливая бактерионосительство. При соот­ветствующих условиях они могут явиться причиной гнойно-вос­палительных процессов в полости рта. Вследствие выраженной ферментативной активности стафилококки принимают участие в расщеплении остатков пищи в полости рта.

Вейлонеллы. Бактерии рода Veillonella представляют собой мелкие грамотрицательные кокки. Клетки имеют сферическую форму, в мазках располагаются попарно, в виде скоплений или коротких цепочек. Неподвижны, не образуют спор.

Облигатные анаэробы. Хорошо растут при 30—37 °С. На плотных питательных средах, образуют колонии 1—3 мм в наи­большем измерении. Колонии гладкие, маслянистые, серовато-белого цвета, по форме чечевицеобразные, ромбовидные или сердцевидные. Относятся к хемоорганотрофам со сложными пищевыми потребностями.

Не ферментируют углеводы и многоатомные спирты. Не разжижают желатин, не образуют индол, не обладают гемолитической активностью. Продуцируют сероводород. Культуры издают характерный зловонный запах.

Вейлонеллы содержат эндотоксины липополисахаридной природы. В полости рта обнаружено два вида этих кокков: Veillonella parvula и Veillonella alcalescens, которые постоянно присутствуют в большом количестве (в 1 мл слюны до 10⁷— 10⁸ ). Количество их возрастает при гнойно-воспалительных процессах в полости рта, особенно при альвеолярной пиорее и одонтогенных абсцессах.

Нейссерии. Грамотрицательные диплококки бобовидной формы. Род Neisseria объединяет сапрофитные и патогенные микроорганизмы (к патогенным относятся менингококки и го­нококки).

Сапрофитные нейссерии всегда в большом количестве встречаются в полости рта здоровых людей

(1—3 млн в 1 мл слюны). Все они являются аэробными (за исключением N. dis-coides). В отличие от патогенных сапрофитные нейссерии хорошо растут на простых питательных средах даже при ком­натной температуре. Оптимальная температура роста 32...37 °С. Различают пигментообразующие виды: N. flavescens. N. pha-ryngis — пигмент различных оттенков желтого цвета и не образующие пигмента (N. sicca). В биохимическом отношении нейссерии малоактивны — сбраживаются лишь немногие угле­воды.

Бранхамеллы. Представляют собой кокки, обычно распо­лагаются попарно. Грамотрицательны, неподвижны, не обра­зуют спор.

По типу дыхания относятся к аэробам. Температурный оп­тимум — около 37 °С. Растут на обычных средах. Углеводы не ферментируют.

В полости рта обнаруживается Branhamella catarrhalis. В мазках со слизистой оболочки часто располагаются внутри лейкоцитов. Некоторые штаммы патогенны для морских свинок \^и мышей.

N. sicca и В. catarrhalis чаще всего обнаруживаются в пуль­пе и периодонте при остром серозном воспалении. Они уси­ленно размножаются при катаральном воспалении слизистой •оболочки полости рта и верхних дыхательных путей.

Помимо кокковой микрофлоры обитателями полости рта являются разнообразные палочковидные формы бактерий.

Молочнокислые бактерии (лактобациллы). У 90 % здоровых людей в полости рта обитают молочнокислые бактерии (в 1 мл слюны содержится 10³—10⁴ клеток).

Бактерии рода Lactobacillus представляют собой палочки ot длинных и тонких до коротких типа коккобацилл. Часто образуют цепочки. Неподвижны, не образуют спор и капсул. Грамположительны, при старении культуры и при повышении кислотности становятся грамотрицательными.

Могут расти при температуре от 5 до 53 °С, оптимальная тем­пература +30...40 °С. Кислотолюбивые, оптимум рН 5,5—5,8. Микроаэрофилы в анаэробных условиях растут значительно лучше, чем в аэробных.

Требовательны к питательным средам. Для их роста необ­ходимы некоторые аминокислоты, витамины, соли, жирные кислоты и др. На элективных питательных средах колонии мел­кие, бесцветные, уплощенные.

По сахаролитическим свойствам отличаются друг от друга, на основании этого различают гомоферментативные и гетероферментативные виды.

Гомоферментативные виды (Lactobacillus casei, L. Lactis) при сбраживании углеводов образуют только молочную кислоту.

Гетероферментативные виды (L fermentum, L. brevis) про­дуцируют около 50% молочной кислоты, 25% С02 и 25 % уксусной кислоты и этилового спирта.

Благодаря образованию большого количества молочной кислоты лактобациллы являются антагонистами других микро­бов: стафилококков, Е. coli и других энтеробактерий. Антаго­нистические свойства молочнокислых бактерий были замечены еще И. И. Мечниковым, который предложил употреблять про­стоквашу из молока, заквашенного L. bulgaricus, для подавле­ния гнилостных бактерий в кишечнике.

До 90% обитающих в полости рта лактобацилл относятся к L. casei и L. fermentum. Молочнокислые палочки не обладают патогенными свойствами, однако их количество резко возрас­тает при кариесе зубов. Для оценки активности кариозного процесса даже предложен «лактобациллентест» — определе­ние количества лактобацилл.

Бактероиды. В полости рта здоровых людей всегда при­сутствуют бактероиды — анаэробные грамотрицательные не-спорообразующие палочки, относящиеся к семейству Bacteroi-daceae. Отличаются большим полиморфизмом — могут иметь палочковидную, нитевидную или кокковидную форму. Не об­разуют капсул. Большинство видов неподвижно. Растут на сре­дах с добавлением белка (крови, сыворотки, асцитической жидкости). Ферментируют углеводы с образованием янтарной, молочной, масляной, пропионовой и других кислот.

Семейство Bacteroidaceae включает несколько родов. Оби­тателями полости рта являются представители родов Васteroides, Fusobacterium, Leptotrichia.

Собственно Bacteroides регулярно обнаруживаются в полости рта (тысячи микробных клеток в 1 мл слюны). Наиболее рас­пространенными видами являются В. melaninogenicus, В. oralis, В. fragilis и др.

Количество бактероидов увеличивается при различных гнойно-воспалительных процессах ротовой полости (в нагноив­шихся зубных гранулемах, при остеомиелите челюстей, актиномикозе, а также при гнойно-воспалительных процессах в других органах — легких, почках и т. д.). Нередко бактерои­ды обнаруживаются в сочетании с другими микроорганизмами, преимущественно анаэробными. В fundiliformis продуцирует экзотоксин. При внутрикожном введении морским свинкам или

кроликам вызывает некроз кожи, при внутривенном — септикопиемию с гнойными очагами в различных органах и тканях. У людей при снижении реактивности может вызывать тяжело протекающий «фундилиформис — сепсис» с образованием абсцессов в суставах, печени, легких, мозге. Входными воро­тами в этом случае могут являться миндалины и раневые по­верхности, например, после экстракции зубов, при травмати­ческих повреждениях лицевых костей.

Бактерии рода Fusobacterium представляют собой верете­нообразные палочки с заостренными концами. В цитоплазме содержат гранулы, которые окрашиваются грамположительно, тогда как сама цитоплазма — грамотрицательно. Неподвижны, не образуют спор и капсул. Фузобактерии различаются по сахаролитической и протеолитической активности.

К сахаролитической группе относятся F. plauti и некоторые другие. Они сбраживают углеводы с образованием большого количества кислоты. Непатогенны для животных.

Протеолитические виды (F. nucleatum, F. biacutum) расщеп­ляют белки с образованием сероводорода, культуры издают гнилостный запах. Иногда патогенны для животных (вызывают перитонит, абсцессы).

Фузобактерии постоянно присутствуют в полости рта (в 1 мл слюны содержится несколько десятков тысяч микробов). Их количество резко возрастает при различных патологических процессах (при ангине Венсана, гингивите, стоматите — в 1000—10000 раз). Фузобактерии находятся в кариозном дентине, в десневых карманах при пародонтите.

Бактерии рода Leptotrichia представляют собой крупные, прямые или слегка изогнутые палочки с закругленными или чаще заостренными концами. Образуют нити, которые могут переплетаться друг с другом. Неподвижны, не образуют спор и капсул, грамотрицательны. Облигатные анаэробы. Растут на средах с добавлением сыворотки или асцитической жидкости. Ферментируют углеводы с образованием молочной кислоты. Известно большое количество видов лептотрихий, все они содержат общий антиген, который обнаруживается с помощью реакции связывания комплемента (РСК). В полости рта при­сутствуют постоянно и в большом количестве (10³—10⁴ клеток в 1 мл слюны). Чаще локализуются у шейки зуба. Матрикс (органическая основа) зубного камня состоит главным образом из лептотрихий. Представителем лептотрихий — обитателей полости рта — является L. buccalis.

Актиномицеты. Обнаруживаются в слюне практически у 100 % людей, очень часто встречаются в десневых карманах. Актиномицеты представляют собой группу нитчатых бакте­рий. По Международной классификации выделены в само­стоятельную группу, порядок Actinomycetales семейство Actinomycetaceae. В эту же группу входят родственные микроорганизмы — Корине- и микобактерии.

Актиномицеты грамположительны, имеют тенденцию обра­зовывать разветвленные нити в тканях или на питательных сре­дах. Нити тонкие (диаметр 0,3—1 мкм), не имеют перегородок, легко фрагментируются, что приводит к образованию палочковидных или кокковидных форм. Неподвижны, не образуют спор в отличие от бактерий сем. Streptomycetaceae.

По типу дыхания относятся к факультативным анаэробам, большинство предпочитает анаэробные условия. Растут при температуре от 3 до 40 °С, оптимальная температура 35— 37 "С.

Культивируют актиномицеты на средах, содержащих сыво­ротку, кровь, асцитическую жидкость, экстракты органов (серд­ца, мозга). Рост медленный, зрелые колонии формируются на 7—15-й день. Колонии мелкие (0,3—0,5 мм), реже крупные, могут иметь гладкую или складчатую, бугристую поверхность. Консистенция колоний кожистая или крошковатая, некоторые колонии с трудом отделяются от питательной среды. Образуют пигмент, благодаря этому колонии могут быть окрашены в чер­новато-фиолетовый, оранжевый, зеленоватый, белый, коричне­вый цвет. На жидких средах растут в виде пленки на поверх­ности или в виде осадка.

Сбраживают углеводы с образованием кислоты. Протеолитической активностью обычно не обладают.

Антигенная структура изучена недостаточно. Обнаружены типо- и видоспецифические антигены. Также недостаточно изу­ченным является вопрос о токсинообразовании. Предполагают, что патогенные актиномицеты содержат эндотоксин.

Актиномицеты являются обитателями кожи и слизистых оболочек, они присутствуют в зубном налете, на поверхности десен, в зубодесневых карманах, в кариозном дентине, в криптах миндалин. В полости рта обычно обнаруживаются A. Israeli!, A. viscosus. Количество актиномицетов резко воз­растает при различных стоматологических заболеваниях, со­провождающихся увеличением числа анаэробных микроорга­низмов. Могут вызывать поражение различных тканей и органов, получившего название актиномикоз.

У здоровых людей в полости рта обнаруживается целый ряд других палочковидных и извитых форм: коринебактерии (дифтероиды), гемофильные бактерии (Haemophilus influenzae — палочка Афанасьева-Пфейффера), анаэробные вибрионы (Vibrio sputorum), спириллы (Spirillum sputigenum) и др.

Спирохеты полости рта. У любого здорового человека в полости рта обитает большое количество сапрофитных спи­рохет. Они обнаруживаются преимущественно в десневых кар­манах.

Клетка спирохеты состоит из осевых фибрилл, образующих осевую нить, и протоплазматического цилиндра, спирально за­витого вокруг нити. Протоплазматический цилиндр и осевые фибриллы заключены во внешнюю оболочку. Осевые фибриллы прикреплены к концам протоплазматического цилиндра, от места прикрепления они тянутся к противоположному полюсу клетки, могут выходить за концы протоплазматического ци­линдра, создавая впечатление жгутиков, однако в отличие от истинных жгутиков они заключены во внешнюю оболочку.

Спирохеты подвижны. Совершают движения трех типов: вращательное, сгибательное, волнообразное.

В полости рта постоянно находятся сапрофитные спирохеты, относящиеся к трем родам семейства Spirochaetaceae:

1) Borrelia;

2) Treponema;

3) Leptospira.

Боррелии представляют собой спиральные клетки с 3— 10 крупными, неровными витками. Грамотрицательны. По Ро­мановскому—Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Облигатные анаэробы. Обитателем полости рта является Borrelia buccalis.

Трепонемы имеют вид туго закрученных спиралей. Завитки равномерные, мелкие. Грамотрицательны. Строгие анаэробы. В полости рта присутствуют: Treponema macrodentium, Т. microdentium (по морфологии очень сходна с возбудителем сифи­лиса Т. pallidum), T. vincentii.

Лептоспиры представлены в полости рта Leptospira dentium. По морфологическим признакам L dentium не отличается от других представителей рода. Клетки имеют форму спиралей с мелкими витками. Один или оба конца могут быть загнуты в виде крючка. Облигатные аэробы.

В чистой культуре спирохеты, встречающиеся в полости рта, не патогенны для человека и животных. Они вызывают патологические процессы в сочетании с другими микроорганизмами, кокками, фузобактериями, вибрионами. Большое количество спирохет, обнаруживается при язвенном стоматите, ангине Венсана, в зубодесневых карманах при тяжелых формах пародонтита, в кариозных очагах и некротизированной пульпе.

Дрожжеподобные грибы рода Candida. Распространены повсеместно. Постоянно обнаруживаются в микробных ассо­циациях на коже, слизистых оболочках открытых полостей че­ловека, в кишечнике.

Род Candida включает около 100 видов, большинство кото­рых не патогенны для человека. Имеются и условно-патоген­ные виды, способные вызвать заболевания при снижении за­щитных сил организма. К ним относятся С. albicans, С. krusei, С. tropicalis, С. pseudotropicalis и др.

Клетки грибов рода Candida могут быть округлой, овоидной, цилиндрической, иногда неправильной формы, диаметр их колеблется от 5 до 8 мкм. Размножаются многополюсным почко­ванием. Не имеют истинного мицелия, образуют псевдомицелий, состоящий из цепочек удлиненных клеток.

Грамположительны, могут окрашиваться неравномерно: пе­риферический слой клетки — в фиолетовый цвет, центральная часть — в розоватый; встречаются целиком грамотрицательные клетки. По Цилю-Нильсену клетки грибов окрашиваются в синий цвет с красными включениями липоидов.

По типу дыхания относятся к аэробам. Оптимальная темпе­ратура роста 30...— 37 °С, несколько медленнее растут при комнатной температуре.

Могут культивироваться на простых питательных средах, лучше растут на средах, содержащих углеводы, сыворотку, кровь, асцитическую жидкость. Наиболее распространенной элективной средой является среда Сабуро (в ее состав входят глюкоза или мальтоза и дрожжевой экстракт).

На плотных средах образуют крупные сметанообразные ко­лонии желтовато-белого цвета с гладкой или шероховатой по­верхностью. Характерно врастание грибов в питательную среду. Созревание колоний происходит к 30-му дню. На жид­ких средах растут в виде пленки и мелких зерен на дне и стен­ках пробирки.

Ферментируют многие углеводы до кислоты и газа, разжи­жают желатин, но очень медленно.

Антигенная структура довольно сложная. Клетки грибов яв­ляются полноценными антигенами, в ответ на них в организме развивается специфическая сенсибилизация, и вырабатываются соответствующие антитела.

Дрожжеподобные грибы обнаруживаются в полости рта здоровых людей (в 1 мл слюны 10²—10³ клеток), причем наблюдается тенденция к их более широкому распростране­нию. Так, в 1933 г. С. albicans были выделены из полости рта у 6 % здоровых людей, в 1939 — у 24 %, в 1954 — у 39 %.

В настоящее время эти грибы встречаются в 40—50 % случаев в полости рта здоровых людей.

При снижении реактивности организма грибы рода Candida способны вызывать заболевания, которые получили название кандидозов или кандидамикозов.

Простейшие полости рта. У 45—50 % здоровых людей обитателем полости рта является Entamoeba gingivalis. Эти микроорганизмы обнаруживаются преимущественно в десневых карманах, криптах миндалин, зубном налете.

Е. gingivalis имеет диаметр 20—30 мкм, очень подвижна,' лучше видна в нативном неокрашенном препарате (раздавлен­ная капля). Аэроб. Культивируют на кровяном или сывороточ­ном агаре, покрытом слоем раствора Рингера с добавлением триптофана (1:10 000).

У 10—20 % людей в полости рта обитает Trichomonas elongata (Trichomonas tenax), имеет грушевидную форму длиной 7—20 мкм. На переднем конце расположены четыре жгутика, отходящие от базальных зерен. Один из жгутиков окаймляет ундулирующую мембрану. У основания жгутиков имеется щелевидное углубление. Предполагают, что оно служит для захвата пищи (бактерий). Трихомонады подвижны, хорошо видны в живом состоянии в неокрашенных препаратах. Куль­тивируют их так же, как и амеб.

Амебы и трихомонады усиленно размножаются при неги­гиеническом содержании полости рта, а также при гингивитах и пародонтите.

Дата добавления: 2015-06-04