Работа 13. Биуретовая реакция на пептидную связь

Химическая природа белка (цветные реакции)

Присутствие белка в растворах можно обнаружить с помощью цветных реакций, обусловленных наличием в белке аминокислот, их специфических групп и пептидных связей. Существуют универсальные цветные реакции – на все белки (биуретовая и нингидриновая) и специфические – на определенные аминокислоты (ксантопртеиновая, Миллона, Фоля и др.)

Биуретовая реакция обусловлена наличием в белке пептидных связей, которые в щелочной среде образуют с сернокислой медью комплексы фиолетового цвета с красным или синим оттенком. Группа, образующая пептидную связь, в щелочной среде присутствует в своей таутомерной енольной форме:

О Н ОН

|| | |

– C – N – – C – N –

При избытке щелочи происходит диссоциация ОН-группы, появляется отрицательный заряд, с помощью которого кислород взаимодействует с медью, возникает солеобразная связь, кроме того, медь образует дополнительные координационные связи с атомами азота, участвующими в пептидной связи, путем использования их электронных пар. Возникающий таким образом комплекс очень стабилен. Интенсивность окраски комплекса зависит от концентрации белка и количества медной соли в растворе.

Исследуемый материал: раствор яичного белка, 1% раствор желатины.

Реактивы: 10% раствор NaOH, 1% раствор CuSO₄.

Оборудование: пробирки, капельницы.

ХОД РАБОТЫ. К 5 каплям водного раствора белка добавляют 3 капли 10% раствора NaOH и 1 каплю 1% раствора CuSO₄ и перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовый цвет. Нельзя добавлять избыток CuSO₄, так как синий осадок маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса.

Работа 14 Нингидриновая реакция на α-аминокислоты

Белки, полипептиды и свободные a-аминокислоты дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином. При нагревании белка с водным раствором нингидрина аминокислоты окисляются и распадаются, образуя СО₂, NH₃ и соответствующий альдегид. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий, фиолетовый, красный, а в случае пролина – в желтый цвет.

Исследуемый материал: раствор яичного белка, 1% раствор желатины.

Реактивы: нингидрин 0,1% водный раствор.

Оборудование: пробирки, капельницы.

ХОД РАБОТЫ. К 5 каплям раствора белка приливают 5 капель 0,1% водного раствора нингидрина и кипятят 1-2 минуты. Появляется розово-фиолетовое окрашивание. С течением времени раствор синеет. Данная реакция не является специфичной, так как ее дают некоторые амины и амиды кислот.

Дата добавления: 2015-07-02