III. План практической работы. 1. Нарисовать схемы микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (полиомиелита, Коксаки-инфекции) – см

1. Нарисовать схемы микробиологической диагностики энтеровирусных инфекций (полиомиелита, Коксаки-инфекции) – см. базовый текст.

2. Учесть РСК в серодиагностике Коксаки-инфекции

Метод диагностики: серологический

Компоненты: исследуемая сыворотка больного человека (в которой ищут антитела к вирусу Коксаки), Коксаки диагностикум (взвесь убитых вирусов), система комплемента в рабочей дозе и гемолитическая система (состоящая из гемолитической сыворотки, антител кролика, и эритроцитов барана).

Постановка: в рабочую пробирку вносятисследуемую сыворотку больного человека, Коксаки диагностикум и систему комплемента в рабочей дозе. Инкубация в течение 30 минут при температуре 37 °C. Далее в рабочую пробирку добавляют гемолитическую систему. Инкубация в течение 30 минут при температуре 37 °C.

Учет: Положительная реакция «+» – пробирка с ровным осадком в виде «красной пуговки» (Коксаки вирус и антитело образуют иммунный комплекс, к которому через Fс-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген — антитело. При добавлении гемолитической системы гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет, т.к. комплемент весь израсходован на формирование первоначального иммунного комплекса). Отрицательная реакция «-» – пробирка равномерно красного цвета - гемолиз эритроцитов (если антиген и антитело не соответствуют друг другу, т.е. в исследуемом образце нет антител, комплемент остается свободным и присоединится к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз).

Заключение: Исследуемая сыворотка содержит антитела к Коксаки вирусу.

3. Учесть и зарисовать ЦПД вирусов полиомиелита в клетках культуры ткани.

Рис. 20 Культура клеток Рис. 21 ЦПД вируса

ЦПД -видимые в световом микроскопе морфологические изменения клеток (вплоть до их отторжения от стекла), возникающие в результате внутриклеточной репродукции вирусов

4. Учесть и обосновать заключение по РН с учетом по цветной пробе в диагностике полиомиелита

Метод диагностики: вирусологический

Компоненты: вирусологический исследуемый материал, типоспецифические полиомиелитные сыворотки (содержащие антитела к вирусу полиомиелита типа 1, 2, 3), культура клеток в питательной среде №199 с индикатором pH среды.

Постановка: Вирусологический материал смешиваетсяс соответствующими типоспецифическими полиомиелитными сыворотками в 3-х пробирках. Оставляют на 1 час при комнатной температуре. Смесь вирус + сыворотка и новая питательная среда для клеток культуры ткани (199) в соотношении 1:10 вносятся в пробирку с клетками культуры ткани, из которой была удалена старая питательная среда желтого цвета. Инкубация в течение 4-9 дней при температуре 37 °C.

Учет: Положительная реакция «+»– пробирка с желтой средой (вирус нейтрализовался типоспецифической сывороткой, а клетки остались жизнеспособными, вырабатывающими кислые продукты метаболизма, изменяющие pH среды в кислую сторону, при этом цвет жидкости меняется с красного на желтый). Отрицательная реакция «-»- пробирка с красной средой (реакции нейтрализации не произошло).

Заключение: Вирусологический материал содержит вирус полиомиелита типа ­I (пример).

5. Зарисовать тельца Бабеша-Негри (по таблице)

Вирус культивируют путем внутримозгового заражения лабораторных животных (кроликов, белых мышей, крыс, хомячков, морских свинок, овец и др.) и в культуре клеток: почек хомячка; нейробластомы мыши; фибробластов человека, куриного эмбриона; Vero-клетки почки обезьяны и др. В нейронах головного мозга, зараженных животных образуются цитоплазматические включения, содержащие антигены вируса. Эти включения впервые были описаны В.Бабешом (1892г.) и А.Негри (1903г.) и названы тельцами Бабеша-Негри (эозинофильные включения вируса овальной формы размером 1-15 мкм, состоящие из вирусного рибонуклеопротеина).

Рис. 22 Тельца Бабеша-Негри

Дата добавления: 2015-06-27