Определение концентраций эритроцитов и лейкоцитов

Определение объема пробы.

Для точного определения объема проходящей через апертуру суспензии в гематологическом анализаторе используются оптическая система для фиксирования менисков столба жидкости, протекающих через специальные калиброванные трубочки.
После начала цикла измерения эритроцитарное и лейкоцитарное разведения начинают поступать через апертуры в измерительные трубочки. При штатном режиме работы в трубочках формируется отчетливо выраженный мениск столба жидкости. Как только этот мениск проходит мимо первого сенсора, в соответствующем измерительном канале начинается подсчет форменных элементов. Процесс счета продолжается до тех пор, пока мениск столба жидкости не пройдет мимо второго сенсора.
Если в столбе жидкости мениск будет сформирован неотчетливо, или во время подсчета частиц через измерительную трубочку будут идти воздушные пузырьки, на дисплей прибора выводятся сообщения о тех или иных ошибках измерения.

Так как в норме в крови человека число эритроцитов в тысячу раз превышает число лейкоцитов, при определении концентрации эритроцитов производится разведение крови в десятки тысяч раз,и подсчитываются все частицы, характерного для эритроцита объема. Незначительной ошибкой, связанной с появлением на 1000 эритроцитов одного лейкоцита, пренебрегают.

Для определения концентрации лейкоцитов кровь разводят в сотни раз и добавляют гемолитик - специальный реагент, лизирующий эритроциты. Лизис должен быть достаточно эффективен, чтобы все эритроциты были полностью разрушены; в противном случае фрагменты эритроцитов будут также подсчитаны прибором.

В норме форменные элементы крови имеют следующие объемы:

• Лейкоциты - 120 - 1000 фл (10^-15 л);
• Эритроциты - 85 - 95 фл (10^-15 л);
• Тромбоциты - 2 - 30 фл (10^-15 л).

На рисунке 2 представлены импульсы, генерируемые различными частицами, проходящими через эритроцитарную апертуру. Импульс (а) вызван тромбоцитом, импульсы (b) и (d) - эритроцитами. Импульс (с) генерирован частицей малого объема, вероятнее всего не имеющей отношения к форменным элементам крови. Правильно установив порог дискриминации, можно отсечь эти импульсы и не учитывать их при подсчете числа тромбоцитов.
Так как эритроциты и тромбоциты в норме сильно отличаются друг от друга по объему, гистограммы их распределения по объему практически не перекрываются, что и позволяет производить подсчет этих частиц из одного разведения в едином измерительном канале. Однако, в ряде случаев наблюдается частичное перекрытие гистограмм, что может свидетельствовать либо о неправильном взятии, либо о патологии крови.

Рисунок.2. Анализ импульсов от различных видов частиц.

В случае, если через апертуру одновременно проходят две или более клеток, измерительное устройство фиксирует только один импульс. Таким образом, прибор «недосчитывает» часть клеток, однако, так как явление носит статистический характер, эту ошибку можно исправить, внеся так называемую поправку на совпадение. В первых моделях гематологических счетчиков эту поправку считали вручную, используя специальные таблицы; анализаторы делают это автоматически.

Определение популяций клеток.

Определение лейкоцитарной формулы - процентного соотношения различных популяций лейкоцитов, производится, как правило, визуально. Использование кондуктометрического принципа позволяет автоматизировать эту процедуру, но лишь до определенной степени. Лейкоциты могут быть разделены на несколько популяций по их объему.
Дифференциальный анализ трех групп лейкоцитов базируется на том принципе, что специальный гемолитик, разрушающий эритроциты, подвергает лейкоциты сжатию, причем различные группы клеток ведут себя по-разному.
Наибольшему сжатию цитоплазмы подвергаются лимфоциты (LYM). На гистограмме распределения лейкоцитов они представлены в области от 35 до 95 фл.
В области от 95 до 130 фл находятся так называемые клетки среднего объема (MID), куда попадают эозинофилы, базофилы и моноциты, реже - миелоциты и бласты.
Самыми большими по объему частицами являются нейтрофильныегранулоциты (GRA). После сжатия цитоплазматические гранулы группируются вокруг ядра, образуя частицы объемом 130 фл и выше.
Все три популяции лейкоцитов рассчитываются как процент от общего числа лейкоцитов по следующим формулам:

LYM%= ,

MID%= ,

GRN%= ,

где PL - число частиц в области лимфоцитов;
PM - число частиц в области клеток среднего объема;
PG - число частиц в области гранулоцитов.
Кроме того, по следующим формулам рассчитывается абсолютное содержание каждой популяции лейкоцитов (⁹ клеток/л):

LYM#= ,

MID #= ,

GRN #= ,

гдеWBC - концентрациялейкоцитов.

Дата добавления: 2015-07-13