Выделение ДНК

Для выделения суммарной ДНК из Synechocystis 6803 клетки из 1,5 мл 3-5-дневной культуры осаждали центрифугированием, промывали 1 мл раствора 50 мМ Tris-HCl, 50 мМ ЭДТА, pH 8,0 и ресуспендировали в 270 мкл буфера STET (8 % сахароза, 5 % тритон X-100, 50 мМ Tris-HCl, 50 мМ ЭДТА, pH 8,0). К суспензии добавляли 15 мкл хлороформа, интенсивно перемешивали в течение 5 мин и добавляли 30 мкл раствора лизоцима (20 мг/мл). Смесь инкубировали при 37°C 60 мин. Полный лизис клеток осуществляли добавлением к суспензии (при мягком перемешивании) 100 мкл 10% SDS и 100 мкл 5 М NaCl. Смесь инкубировали при 65°C в течение 40 мин. Образцы депротеинизировали трехкратной экстракцией белков равным объемом хлороформа. ДНК из водной фазы осаждали добавлением 500 мкл изопропанола. Смесь инкубировали 15 мин при комнатной температуре и центрифугировали 15 мин при 12000 g. Осадок ДНК дважды промывали 70% этанолом, растворяли в 50 мкл буфера ТЕ (10 мМ трис-HCl, 1 мМ ЭДТА, pH 7,5) и хранили при –20⁰С.

Раздел «Результаты»

Последовательно описываются результаты исследований с приведением первичных данных и, в случае необходимости, статистической обработки. Если изложение первичных данных слишком громоздко, то их следует вынести в Приложение. Все таблицы и рисунки должны быть пронумерованы и озаглавлены. Название таблицы выносится над таблицей, название рисунка – под рисунком. Следует обратить внимание на содержание подписей к рисункам, графикам и электрофореграммам, которые должны быть информативными. Все таблицы и иллюстрации должны быть описаны в тексте. На каждую таблицу и рисунок должна быть ссылка в тексте (табл. 1), (рис. 1).

Раздел «Обсуждение»

Этот раздел должен содержать обсуждение результатов и сопоставление их данными литературы. Одна из главных целей этого раздела заключается в обосновании выводов, которые следуют из полученных результатов. При необходимости обсуждение можно совместить с результатами в одном разделе «Результаты и обсуждение».

Раздел «Выводы»

Этот раздел не являются кратким содержанием (резюме) работы или перечислением результатов. Выводы должны соответствовать результатам, то есть они должны содержать заключения, логически вытекающие из полученных результатов. Выводы должны быть пронумерованы.

Раздел «Список литературы»

Раздел включает все цитированные в работе источники. Все ссылки пронумерованы. Список приводится в алфавитном порядке. Сначала приводятся работы на русском языке, затем на иностранных. Каждая ссылка на журнальный источник должна включать перечень всех авторов статьи с инициалами, полное название работы, название журнала, год издания, том, (номер), страницы. Ссылка на монографию или сборник статей включает перечень авторов с инициалами, название статьи (в случае сборника), название книги (в случае сборника указываются его редактор(ы), место и год издания, а также страницы, использованные как источник цитирования.

Пример оформления списка литературы:

1. Бабыкин М. М., Сидорук К. В., Зинченко В. В., Нефедова Л.Н., Церфф Р. и Шестаков С. В. Об участии регуляторного гена prqR в развитии устойчивости к метилвиологену у цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6803. Генетика, 2003, 39: 18-24.

2. Arfin S.M., Kendall R.L., Hall L., Weaver L.H., Stewart A.E., Matthews B.W. and Bradshaw R.A. Eukaryotic methionyl aminopeptidases: two classes of cobalt-dependent enzymes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92: 7714–7718.

3. Маниатис Т., Фрич Э. и Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984, С. 479.

4. Parkinson J.S. Genetic approaches for signaling pathways and proteins. In: Two-component signal transduction. J.A. Hoch and T.J. Silhavy (eds). ASM Press, Washington, DC. 1995. P. 9-23.

Раздел «Благодарности»

Этот раздел не является обязательным, но является правилом хорошего тона. Здесь в вольной форме автор благодарит всех, кто, по его мнению, причастен к успешному выполнению работы.

Дата добавления: 2015-07-13