Количественное определение активности липазы в панкреатическом соке. Влияние желчи на активность липазы

Аудиторная работа

Лабораторные работы (э мульгирование липида, качественная реакция на желчные кислоты, количественное определение активности липазы в панкреатическом соке, влияние желчи на активность липазы).

1. Эмульгирование липидов является необходимым условием их ферментативного расщепления в пищеварительном тракте. Основной фактор, обеспечивающий эмульгирование в ЖКТ, - желчные кислоты, которые являются поверхностно-активными веществами. Менее активны в этом отношении мыла и углекислый натрий, участвующий в образовании мыл.

Ход работы: В пять пробирок внести по 0,5 мл растительного масла, добавить в первую пробирку 2 мл дистиллированной воды, во вторую – 2 мл желчи, в третью – 2 мл 1% р-ра мыла, в четвертую – 2 мл 1% р-ра углекислого натрия. Встряхнуть до образования эмульсии, определить время, необходимое для расслоения эмульсии.

Результаты работы представить в виде таблицы.

2.. Качественная реакция на желчные кислоты. Принцип метода: желчные кислоты (в присутствии серной кислоты) дают пурпурное окрашивание с оксиметилфурфуролом, который образуется из фруктозы, входящей в состав сахарозы.

Ход работы: на сухое предметное стекло, помещенное на лист белой бумаги, нанести 1 каплю разведенной в 2 раза водой желчи и 1 каплю 20% раствора сахарозы, смешать. Рядом на стекло нанести 3 капли концентрированной сер­ной кислоты так, чтобы капли сливались. Через некоторое время в месте сли­яния капель развивается красное окрашивание, переходящая при стоянии в красно-фиолетовое (пурпуровое).

Принцип метода: метод основан на нейтрализации щелочью жирных кислот, образующихся при гидролизе триацилглицеридов липазой. Активность липазы выражается количеством миллилитров 0,1N NaOH, затраченного на титрование (нейтрализацию) свободных жирных кислот, образующихся при гидролизе липидов молока под влиянием 1 мл ферментного раствора.

Ход работы: Отмерить в 3 колбы (№ 1, 2 и 3) по 4 мл молока. Добавить в каждую колбу по 5 капель фенолфталеина и одинаковое количество 0,1 н NaOH до появления красной окраски (щелочь нейтрализует все кислые продукты молока). Добавить в 1-ю колбу 4 мл воды, во 2-ю – 2 мл панкреатического сока и 2 мл воды, в 3-ю – 2 мл панкреатического сока и 2 мл желчи. Все колбы поместить в термостат (38^оС) на 30 мин.

По истечении указанного времени колбы извлечь из термостата и в каждой отметить изменение цвета смеси. Содержимое колб 2-й и 3-й оттитровать 0,1 н NaOH до одинаковой окраски с пробой №1.

Рассчитать активность липазы в колбах 2 и 3 и сделать вывод.

Выполнить следующее:

1. Найти среди перечисленных жирных кислот ненасыщенные. Подобрать для каждой из них соответствующее обозначение:

1. Пальмитиновая а. 16:0

2. Олеиновая б. 18: 0

3. Стеариновая в. 18:1 D 9

4. Линолевая г. 20: 4 D 5,8,11,14

5. Линоленовая д. 18: 2 D 9,12

6. Арахидоновая е. 18: 3 D9,12,15

2. Подберите к каждому типу липидов (1 – 6) и их производных соответствующую специфическую функцию (а – е):

Дата добавления: 2015-08-31