Биологический метод Фортнера

Химические методы

1. Прибор Омелянского — для поглощения кислорода используется пирогаллол.

2. Среда Вильсон — Блера. Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.

Чашку Петри с толстым слоем агара делят на 2 половины на одну половину засевают облигатный аэроб — «чудесную» палочку, на другую половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают растопленным парафином. Через 24 — 48 часов в чашке вырастают аэробы, затем, когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножаться анаэробы.

Аппаратура: микроанаэростаты - толстостенные металлические или пластиковые цилиндры с герметичечки закрывающимися крышками, на которых имеются вакуометр и краны для присоединения к вакуум насосу или баллону с газом. Засеянные анаэробами питательные среды помещают в анаэростат,откачивают воздух и замеряют его газовой смесью, инкубируют 2-3 суток при t =37º

Вместо анаэростатов используют газонепроницаемые полиэтиленовые пакеты

Анаэробный бокс - прозрачная плексиглазовая камера о шлюзом, отверстиями для рук с рукавами, заканчивающимися резиновыми перчатками. В ем создают стерильные условия, закачивают газовую смесь поддерживают температуру 37 ºС.

Этапы выделения чистых культур облигатных анаэробов.

1) получение изолированных колоний (посевы на пит средах инкубируют в микроанаэростатах 48-72ч при 37º.

2) получение чистой культуры (изучают морфологические и культуральные свойства. проводят параллельный рассев каждой отобранной колонии на 2 чашки Петри с пит средой, 1 чашку инкубируют в аэробных условиях, другую в - в анаэробных)

Отбирают культуры, которые выросли в анаэробных условиях (исключение факультативных анаэробов)

3) идентификация выделенных облигатных анаэробов (биохимическая, микротест -система)

7.Ферменты бактерий: классификация, свойства. Постоянные и непостоянные ферменты, генетическая регуляция. Экзо- и эндоферменты. Специфичность действия ферментов. Ферменты патогенности. Методы определения ферментативной активности микроорганизмов. Их диагностическое значение.

Ферменты-это спец-ие орг-ие катализаторы белковой природы.фер-ты м.б.простыми и слож.Прос - уреаза, пепсин, трипсин, амилаза. Слож. - каталаза,дегидрогеназа, цитохромы.

В основе всех метаболических реакций в бактериальной клетке лежит деятельность ферментов, которые принадлежат к 6 классам: оксиредуктазы, трансферазы, гидролазы, лигазы, лиазы, изомеразы. Ферменты, образуемые бактериальной клеткой, могут локализоваться как внутри клетки — эндоферменты, так и выделяться в окружающую среду — экзоферменты. Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки доступными для проникновения внутрь источниками углерода и энергии. Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в окружающую среду, расщепляют крупные молекулы пептидов, полисахаридов, липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются ферментами агрессии. Некоторые ферменты локализованы в периплазматическом пространстве бактериальной клетки. Они участвуют в процессах переноса веществ в бактериальную клетку. Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и — в некоторых случаях — для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности пользуются при установлении таксономического положения бактерий. Наличие экзоферментов можно определить при помощи дифференциально-диагностических сред, поэтому для идентификации бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора дифференциально-диагностических сред.

По постоянству действия:

- Ферменты, постоянно участвующие в обменных процессах - конституитивные. Они принимают активное участие в синтезе структурных компонентов.

- Ферменты, действующие только при наличии субстрата – адаптационные: ферменты транспорта и катаболизма лактозы – галактоздпермиаза, β-галактозидаза, галактозидацетилтрансфераза.

Ферменты патогенности:

1) гиалуронидаза – расщепляет ГАГ (матрикс соедин. ткани), что облегчает механическое продвижение по ткани

2) уреаза – расщепляет мочевину с образованием аммиака, что помогает выжить в очень кислой среде

3) гемагглютинины – запускают агглютинацию крови, что создает благоприятные условия для роста и размножения моргов.

4) лецитиназа – расщепляет желток куриного яйца

5) пенициллаза – расщепляет пенициллин (первый антибиотик)

Различают два главных вида специфичности ферментов: субстратную специфичность и специфичность действия.

Субстратная специфичность, это способность фермента катализировать превращения только одного определенного субстрата или же группы сходных по строению субстратов. Определяется структурой адсорбционного участка активного центра фермента.

Различают 3 типа субстратной специфичности:

1. абсолютная субстратная специфичность - это способность фермента катализировать превращение только одного, строго определенного субстрата;

2. относительная субстратная специфичность - способность фермента катализировать превращения нескольких, сходных по строению, субстратов;

3. стереоспецифичность - способность фермента катализировать превращения определенных стереоизомеров.

Методы определения ферментативной активности микрооорганизмов.

Дата добавления: 2015-08-31