Вопрос 1. Микрофлора тела человека. Микробные биоценозы. Причины изменения качественно-количественного состава микробиоценозов. Функции. Способы коррекции микробиоценозов

Микрофлора тела человека

Молекулярно-генетические методы диагностики. Гибридизационный анализ нуклеиновых кислот, секвенирование ДНК. Области применения генетических технологий.

ПЦР с обратной транскрипцией

Цифровая количественная ПЦР

ПЦР в реальном времени

В данном варианте постановки ПЦР количество продукта ПЦР в реакционной смеси регистрируется постоянно в ходе протекания реакции. Это позволяет построить кривую протекания реакции и, исходя из неё, рассчитать количество искомых молекул ДНК в образцах.

Новый, дорогостоящий и пока малораспространенный вариант ПЦР, позволяющий более точно определять количество ДНК в образце.В данном варианте реакционная смесь, содержащая флуоресцентный краситель, разбивается на огромное число микроскопических объемов (например, капелек в эмульсии). После протекания ПЦР анализируется, в какой доле капелек реакция оказалась положительной и, соответственно, наблюдается флуоресценция. Эта доля будет пропорциональна числу искомых молекул ДНК в образце.

В данном случае перед тем или иным вариантом ПЦР производится реакция обратной транскрипции (РНК в ДНК) с использованием фермента ревертазы. Таким образом, этот метод позволяет проводить качественное или количественное обнаружение молекул РНК. Это может использоваться для детекции РНК-содержащих вирусов или определения уровня транскрипции (количества мРНК) того или иного гена.

Секвенирование биополимеров (белков и нуклеиновых кислот — ДНК и РНК) — определение их аминокислотной или нуклеотиднойпоследовательности (от лат. sequentum — последовательность). В результате секвенирования получают формальное описание первичной структуры линейной макромолекулы в виде последовательности мономеров в текстовом виде. Размеры секвенируемых участков ДНК обычно не превышают 100 пар нуклеотидов (next-generation sequencing) и 1000 пар нуклеотидов при секвенировании по Сенгеру. В результате секвенирования перекрывающихся участков ДНК, получают последовательности участков генов, целых генов, тотальной мРНК и даже полных геномов организмов[1][2].

Для секвенирования применяют методы Эдмана, Сэнгера и другие; в настоящее время для секвенирования генов обычно применяют метод Сэнгера с дидезоксинуклеозидтрифосфатами (ddNTP). Обычно до начала секвенирования производят амплификацию участка ДНК, последовательность которого требуется определить, при помощи ПЦР.

Нормальная микрофлора человека, как и животных представяет собой сложившуюся в процессе длительной эволюции совокупность множества микробиоценозов, заселяющих кожу и слизистые оболочки полостей, сообщающихся с окружающей средой, внутренняя среда здорового организма практически стерильна.

Микробиоценозы -симбиотическая ассоциация популяций микроорганизмов, обитающих в определенном биотопе (области тела, экологической нише), обладающая специфичностью, постоянным качественным и количественным составом и способностью к аутостабилизации. Микробиоценозы, свойственные разным биотопам, могут иметь значительные отличия в видовом составе микроорганизмов и их количественном содержании.

В любом микробиоценозе различают две популяции: индигенную (характерную резидентную, аутохтонную) и транзиторную (случайную, аллохтонную) микрофлору. Облигатные представители индигенной микрофлоры постоянно присутствуют в организме в больших количествах.

Причины изменения микрофлоры:

Дисбакериоз

-длительная антибиотико-,химио-,гормонотерапия.

-воздействие жесткого гамма-излучения

-Заболевания желудочно-кишечного тракта

-стрессовые и экстремальные ситуации

-длительное пребывание в стационарах

Основными механизмами, участвующими в контроле качественного и количественного состава микроорганизмов, являются факторы естественной резистентности и адаптивного иммунитета. Контакты с бактериальными антигенами определяют созревание иммунной системы. Состав микрофлоры кишечника косвенно отражает особенности физиологического состояния как защитных, так и других систем организма в различные периоды жизни.

Дата добавления: 2015-08-31