Методы лабораторной диагностики

Вопрос 5. Факторы, оказывающие влияние на количественный и видовой состав микрофлоры человека. Современные методы изучения микробиоты. Охарактеризуйте биопрепараты: пробиотики, пребиотики, синбиотики.

На количественный и качественный состав кишечноrо микробиоценоза оказывают влияние следующие факторы:

Возраст

Климат, географическое положение

Этнические особенности

Время года, сезонные колебания

Характер и тип питания

Профессия

Индивидуальные особенности организма

в целом, характер кишечного микробиоценоза находится в тесной взаимосвязи и взаимозависимости с различными физиологическими и патологическими состояниями организма.

Классическим методом определения качественного и количественного состава микрофлоры явл. бактериологическое исследование. Для этой цели пробу биоматериала (например: 1,0 г фекалий) предварительно разводят и полученные 10-кратные разведения засевают на чашки Петри с различными селективными, обогащенными и дифференциально-диагностическими средами, на которых выделяют около 20 видов- представителей нормальной микрофлоры как анаэробов, так и анаэробов. Количественное содержание микроорганизмов в 1,0 г биоматериала определяют путем подсчета выросших на чашках колоний (из разных разведений) и полученное число умножают на соответствующее разведение. Результат выражают в ком г или lg КОЕ г, и сравнивают с эталонной таблицей, в которой представлены количественные показатели фекальной микрофлоры различных возрастных групп.

В настоящее время разработаны и применяются рaзличные био- химические и физико-химические экспресс-методы,позволяющие получать результат в день исследования. С помощью этих методов выявляют изменения в составе микрофлоры косвенным путем -по изменению состава метаболитов. Например, уменьшение количества янтарной кислоты связано со снижением количества бифидобактерий, увеличение концентрации пропионовой кислоты -с избыточным размножением бактероидов

Наиболее известными экспресс-методами являются газово-жид-костная хроматография, применяемая для определения в фекалиях летучих веществ-летучих жирных кислот и ароматических соединений (фенолы, индолы) и жидкостная хроматография, позволяющая определять нелетучие соединения, такие как простые и сложные амины, фенилпропионовую кислоту, карбоновые кислоты и другие метаболиты. Эти методы не позволяют идентифицировать содержащиеся в исследуемом материале анаэробы до вида.

Экспресс-методы пригодны для массовых обследований (скрининга), их проводят на специальной аппаратуре. Во многих странах экспресс-методы широко применяются совместно с бактериологическим методом или заменяя его. В Российской Федерации основной метод исследования нормальной микрофлоры-бактериологический.

Эскпресс-методы применяют в основном при научных исследованиях и сравнительно редко на практике. В последние годы внедряется в практику ПЦР.

пробиотики – это непатогенные для человека микроорганизмы, которые способны восстанавливать нормальную микрофлору органов, а также губительно воздействовать на патогенные и условно-патогенные бактерии. Иными словами, пробиотиками называют микробы, которые в норме составляют микрофлору различных органов человека.

В настоящее время к пробиотикам относятся следующие микроорганизмы:

• Лактобактерии (L. acidophilus, L. plantarum, L. casei, L. bulgaricus, L. lactis, L. reuteri, L. rhamnosus, L. fermentum, L. jonsonii, L. gassed);

• Бифидобактерии (B. bifidum, B. infantis, B. longum, B. breve, B. adolescents);

• Непатогенные разновидности Escherichia Coli;

• Непатогенные разновидности Bacillus (В. subtilis);

Пребиотиками, согласно определению ВОЗ, называются вещества, которые не всасываются в тонкой кишке, но создают благоприятные условия и стимулируют рост нормальной микрофлоры толстого кишечника.

То есть, пребиотики, в отличие от пробиотиков – это химические вещества, которые содержатся в довольно широком спектре продуктов питания. Наибольшее количество пребиотиков содержится в молочных продуктах, кукурузе, крупах, хлебе, луке, чесноке, фасоли, горохе, артишоке, аспарагусе, бананах и др.

Собственно к пребиотикам относятся следующие органические соединения и компоненты пищи:

• Олигофруктоза;

• Инулин;

• Галактоолигосахариды;

• Парааминобензойная кислота;

• Пантотенат кальция;

Синбиотики (или симбиотики) — это физиологически функциональные пищевые ингредиенты, включающие в себя комбинацию пребиотиков и пробиотиков (пробиотических культур вместе со стимулирующим их размножение субстратом), которая обладает свойством взаимного усиливающего (положительного) воздействия на физиологические функции и процессы обмена веществ в организме человека.

Вопрос 6. Состав микрофлоры толстого кишечника по данным культурального и молекулярно-генетических методов. Значение нормальной микрофлоры в жизнеобеспечении макроорганизма. Участие кишечной флоры в реализации иммунных механизмов на уровне интестинального тракта.

Микрофлора толстого кишечника-см выше

Иммуностимулирующее действие.

Нормальная микрофлора поддерживает мобилизационную готовность иммунной системы, стимулирует как местный, так и общий иммунитет (невосприимчивость к заболеваниям). Механизм такой стимуляции достаточно сложный, и включает в себя, в том числе адъювантное действие бактериальных пептидов. Бактериальные модулины нормофлоры стимулируют рост иммунокомпетентных клеток, увеличивают синтез иммуноглобулинов, интерферона, цитокинов, повышают уровень пропeрдина и комплемента, увеличивают активность лизоцима. Иммуностимулирующее действие как самой нормофлоры,таи и ее бактериальных компонентов убедительно доказано как в модельных экспериментах,так и на практике.

Основные функции нормальной микрофлоры

1)Защитное действие. Нормофлора препятствует заселению и развитию в организме хозяина посторонних МО, в том числе возбудителей инфекционных заболеваний.

Это происходит по механизму формирования колонизационной резистентности и за счет антагонистической активности нормальной микрофлоры.

2)Иммуномодулирующее действие

3) Детоксицирующие действие – норм микрофлора оказывавет выраженное детоксикационное действие в отношении экзо- и эндотоксинов. Детоксикация идет как по механизму микробной биотрансформации токсинов(деградации) с образованием конечных нетоксичных продуктов, так и по механизму энтерсорбции.

4)Участие в пищеварительной и всасывающей функции кишечника.

5)Регуляторная и морфокинетическая функция

(доп функции см выше)

МИКРОФЛОРА ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА

7. Микрофлора толстого кишечника как основной резервуар микробной флоры макроорганизма. Методы изучения: культуральный метод, молекулярно-генетический – изучение метагенома. Значение нормальной микрофлоры для организма.

В толстом кишечнике находится огромное количество м/о, общая масса около 1,5-3 кг, до 500 видов. Преобладают облигатные анаэробные м/о (95%).

Различают полостную (в просвете кишки) и мукозную флору(на поверхности эпителиальных клеток, в мукозном геле, в бактериальной биопленке).

Основные представители:

- бифидобактерии – грам + палочки, облигатные анаэробы. Образуют лизоцим, бактерицины, кислые продукты.

- лактобациллы – грам+ палочки, микроаэрофилы, выработка молочной кислоты, спирта.

- эубактерии – грам+ палочки, строгие анаэробы, конъюгация желчных кислот

- клостридии – грам+ палочки, анаэробы, поддержание колонизационной резистентности, расщепление желчных кислот.

- бактероиды – грам – палочки, анаэробы, деконъюгация желчных кислот, иммуногенные свойства, расщепление углеводсодержащих компонентов пищи.

Эшерихии – грам- палочки, фак. Анаэробы (клебсиеллы, протеи)

Стафилококки – грам +, фак. Анаэробы

Стрептококки – грам+, фак. Анаэробы

Транзиторная флора – грибы Candida.

Методы изучения:

1) Бактериологический – пробу фекалий 1 гр разводят, разведения засевают на чашки Петри с элективными средами, на которых идентифицируют виды м/о. Количественное содержание м/о определяют путем подсчета выросших колоний и умножением на соответствующее разведение. Сравнивают с эталонной таблицей, где показаны количественные показатели микрофлоры у разных возрастных групп).

2) Молекулярно-генетический – судят о наличии в образце различных м/о по определению Днк в метагеноме(материал, полученный напрямую из образца среды. Основное отличие метагеномного подхода – учет некультивируемых м/о вместе с с культивируемыми.

3) Газово-жидкостная хроматография(определяют летучие вещества, жидкостная хроматография (нелетучие вещества).

Функции микрофлоры:

- регуляция газового состава

- продукция ферментов, участвующих в метаболизме белков, жиров, углеводов, что способствует пищеварению, усиливает перистальтику.

Дата добавления: 2015-08-31