Отбор случайных мутаций

Отбор положительных мутантов

Иногда для этого удаётся использовать естественный отбор. Например, хересные винные дрожжи (Sacharomyces oviformis), способные переокислить спирт в продукты, придающие вину хересный букет, не размножаются при концентрациях спирта больше 15 %. Культивируя их при постепенном увеличении концентрации спирта до 18 %, удалось выделить штамм, способный к образованию хереса в этих условиях.

Метод применяется в тех случаях, когда нет сведений о пути синтеза желаемого продукта и его регуляции. Метод состоит из нескольких этапов (ступенчатый отбор с применением мутагенов).

Каждый этап состоит в следующем исходная культура обрабатывается одним мутагеном или разными, взятым в нескольких дозах, обеспечивающих разную выживаемость. Из каждого опыта отсеивают не менее 100 колоний без выбора. Значения уровней продукции вариантов после обработки мутагеном выражают в процентах к уровню продукции исходной культуры и распределяют в вариационном ряду.

Полученные вариационные ряды сравнивают с контрольным рядом исходной культуры.

В результате сравнения выявляют положительные и отрицательные варианты, которыми считают все клоны, уровень продукции из которых выходит за пределы ±2σ контрольного ряда. Положительные варианты – материал для дальнейшей работы. Дозы мутагена, давшего положительные варианты, целесообразно использовать ещё раз. После нескольких этапов все лучшие варианты суммируют, результаты статически обрабатывают и выбирают оптимальный вариант. Наиболее эффективны первые этапы отбора, затем темп падает, для устранения этого меняют мутагенный фактор, переходят на другую селекционную линию и т. д.

Отбор по количественному признаку среди мутантов с определённым фенотип

Метод применяют, используя сведения о пути, регуляции и взаимосвязях синтеза желаемого продукта у данного микроорганизма.

Дата добавления: 2014-01-04