Приготовление питательных сред

Требования к питательным средам

1. Содержат все питательные вещества, необходимые для жизни бактерий (белки, жиры, углеводы, витамины, микроэлементы)

2. Имеют оптимальную pH — для большинства бактерий pH 7,2-7,4 (за исключением холерного вибриона и палочки Коха — pH 9,0 и 6,5)

3. Имеют оптимальную влажность (свежеприготовленные среды)

4. Изотоническое состояние (осмотическое давление среды должно быть такое же, как внутри бактериальной клетки)

5. Стерильность

6. Посуду для приготовления питательных сред категорически запрещается обрабатывать дезрастворами. Только автоклав или кипячение.

Классификация питательных сред:

По исходным компонентам:

1. Натуральные (мясо-пептонный агар, сыворотка, кровь, молоко и др.)

2. Синтетические (из химических органических и неорганических соединений)

По консистенции:

1. Жидкие (бульоны)

2. Плотные (агаровые — 1 и 2% и безагаровые — свернутая сыворотка, яичные среды)

3. Полужидкие (0,5% агар)

По назначению:

1. Основные — для выращивания большинства бактерий. Простые (мясо-пептонные) и сложные (содержащие кровь, сыворотку, желчь и др. компоненты)

2. Элективные — для выделения определенного вида бактерий (солевой агар, щелочной агар)

3. Дифференциально-диагностические среды — для определения биохимической активности (кровяной агар, желтковый агар)

4. Накопительные (жидкие, среды обогащения) среды — селенитовый бульон, желчный бульон.

5. Консервирующие среды — для транспортировки и хранения исследуемого материала — глицериновая смесь, фосфатный буфер.

Исходным сырьем для приготовления натуральных питательных сред служат продукты животного и растительного происхождения: мясо, молоко, яйца, картофель, костная и рыбья мука, а также сгустки крови, плацента, казеин. Исходные продукты варят, получая бульон (мясо-пептонный бульон). Полученный бульон осветляют, фильтруют, определяют pH с помощью индикаторной бумаги и pH-метра. Доводят до нужной pH добавляя щелочь или кислоту. Бульон разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 20 минут.

Питательный бульон служит основой для приготовления различных сред. Для получения плотных агаровых питательных сред к питательному бульону добавляют 2% агара, для полужидких — 0,5% агара.

Агар — это продукт морских водорослей, обладающий свойством плавится при температуре 80-85ºС и затвердевать при 40ºС. При добавлении к бульону агар превращает его в плотную среду (при комнатной температуре до 40ºС). Плотные среды, содержащие агар, называют агаровыми.

Безагаровые плотные среды — свернутая сыворотка, свернутый яичный белок сами по себе являются плотными. Свертывание белков крови, яйца проводят в свертывателе Коха при температуре 85ºС в течение 3 дней по 1 часу. В настоящее время в микробиологической практике чаще используют готовые синтетические среды в сухих порошках, которые перед использованием разводят холодной водой по инструкции, кипятят и разливают по чашкам и пробиркам.

Дата добавления: 2013-12-13