Разлив сред

Элективные питательные среды

Дифференциально-диагностические среды

Применяются для разграничения отдельных видов или групп микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды микроорганизмов различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.

В состав ДДС входят:

1. Питательная основа, обеспечивающая размножение микроорганизмов

2. Определенный углевод — лактоза

3. Индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о сдвиге pH среды в кислотную сторону, вследствие ферментации соответствующего углевода.

ДДС активно применяются для дифференциации видов микроорганизмов семейства кишечных.

Предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании этих сред исходят из биологических особенностей, которые отличают микроорганизмы от большинства других. Например, избирательный рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации соли, холерного вибриона — в щелочной среде.

1. Агаровых сред в чашки Петри:

а) расплавить на водяной бане, остудить до 45-50ºС с МПА

б) поставить чашку крышкой вверх

в) сосуд до средой взять в правую руку, держа его у огня

г) левой рукой вынуть пробку, зажав ее мизинцем и ладонью

д) обжечь горлышко бутылки со средой и двумя пальцами левой руки слегка приоткрыть крышку

е) ввести под нее горлышко бутыли, не касаясь им края чашки и налить 15-20 мл. среды.

Если посев проводят в день разлива среды, то её необходимо подсушить в термостате 20-30 минут в разобранном виде, открыто стороной вниз. Если посев проводят на следующий день, то чашки не подсушивая заворачивают в ту же бумагу, в которой их стерилизовали и помещают в холодильник.

2. Агаровых среда в пробирки:

а) взять сосуд с расплавленной и остуженной до 45ºС средой

б) левой рукой взять пробирку

в) правой рукой извлечь пробку из пробирки, а левой рукой из сосуда со средой, зажав ее мизинцем и ладонью

г) обжечь края пробирки и сосуда со средой, внести в пробирку 3-5 мл среды

д) вновь обжечь горлышки емкостей, закрыть из пробками

Агаровые среды могут застывать в пробирках в виде:

1. Скошенного столбика

2. Комбинированного столбика

3. Столбика

Для получения скошенного и комбинированного столбика, пробирки с расплавленной агаровой массой укладывают в наклонном положении на специальную подставку, чтобы среда не заходила на 2/3 пробирки, не смачивала пробку. После застывания среды, пробирки ставят вертикально в штатив, дают стечь конденсату вниз. Пользоваться средой без конденсата нельзя. Ее следует снова растопить на водяной бане и скосить.

Наименование	Среда Эндо	Среда Левина-ЭМС	Среда Плоскирева
Компоненты среды: 1. Питательная основа 2. Углевод 3. Индикатор	1. МПА 2. Лактоза 3. Спиртовой раствор основного фуксина, обесцвеченный раствором сульфита натрия	1. МПА 2. Лактоза 3. Водные растворы метиленовой сини и эозина	1. МПА 2. Натриевые соли жел.к-т 3. Лактоза 4. Натрий лимонно-кислый 5. Нейтральрот 6. Бриллиантовый зеленый
Принцип действия	Микроорганизмы, расщепляющие лактозу до кислоты, изменяют pH среды в кислую сторону. Связанный фуксин раствором сульфата натрия освобождается и окрашивает колонии и среду вокруг в красно-малиновый цвет. Колонии микроорганизмов, не расщепляющих лактозу, остаются бесцветными.	Микроорганизмы расщепляющие лактозу до кислоты формируют колонии темно-синего цвета,а не разлагающие лактозу образуют бесцветные колонии.	Микроорганизмы расщепляющие лактозу до кислоты формируют колонии оранжевого цвета, а не разлагающие лактозу — бесцветные.
Практическое применение	Для выделения чистых культур энтеробактерий и дифференциации лактозоотрицательных (как правило возбудителей кишечных инфекций) от лактозоположительных (например кишечные палочки)
Внешний вид среды до посева	Среда плотная, слабо розового цвета. Разливается в чашки Петри. Готовится из сухой баночной среды.	Среда плотная, темно-лилового цвета, разливается в чашки Петри. Готовится из сухой баночной среды	Среда плотная, красно-оранжевого цвета, разливается в чашки Петри. Готовится из сухой баночной среды.

Мясо-пептонный агар

Бесцветные – патогенные бактерии, окрашенные – сапрофиты.

Кровяной агар

Патогенные – образуют зоны гемолиза.

Желточно-солевой агар (ЖСА)

Сапрофиты – цветные, патогенные – бесцветные с зоной помутнения перламутрового оттенка.

Среда ЭНДО

Сапрофиты – малиновые, патогенные – бесцветные

Среда Левина ЭМС

Сапрофиты – синие, патогенные – бесцветные

Среда Плоскирева

Сапрофиты – оранжевые, патогенные – бесцветные.

Дата добавления: 2013-12-13