Определение сахаролитической активности

Методики постановки биохимических тестов

Для этого используют «Пестрый» ряд Гисса, который бывает жидким и полужидким.

Жидкие среды Гисса: дистиллированная вода, пептон, поваренная соль, определенный углевод (глюкозу, лактозу, сахароза, маннит, мальтоза), индикатор (Андреде, или бромтимолблау, или ВР-водный голубой 4-розовая кислота. Разливают в пробирки по 3 мл. Для обнаружения газов, являющихся конечными продуктами распада сахаров, в каждую пробирку опускают «поплавок»-трубочку диаметром 0,5-0,7 см, запаянную с одного конца. «Поплавок» погружают в среду запаянным концом к верху. При стерилизации среды он полностью заполняются средой. Ряд Гисса содержит обычно по 5 пробирок со следующими углеводами: глюкозой, мальтозой, сахарозой, лактозой, маннитом. При расщеплении сахаров среда приобретет светлый цвет. Чем более патогенная флора, тем меньше пробирок светлого цвета.

Андреде-среды свежеприготовленные, до внесения имеют соломенно-желтый цвет; при расщеплении углевода до кислоты, цвет изменяется до ярко-розового цвета.

Индикатор бромтимол синий. Свежеприготовленные среды болотно-зеленого цвета; при расщеплении углевода среда приобретает желтый цвет. При расщеплении углевода до кислоты и газа меняется не только первоначальный цвет среды, но и происходит вытеснение жидкости, находящейся в поплавке у запаянного его конца, т. к. там собираются воздушные пузырьки.

Полужидкие среды Гисса: дистиллированная вода, пептон, поваренная соль, агар, углевод, индикатор BP. Разливают столбиком, посев исследуемой культуры уколом. Свежеприготовленные среды имеют фиолетовый цвет, при расщеплении углеводов цвет среды меняется до голубого цвета. Газообразование определяется по наличию разрыва агарового столбика.

Среда Ресселя. В состав входят: сухой питательный агар с индикатором BP, лактоза, глюкоза. Готовят на дистиллированной воде. Разливают в пробирки по 5-6 мл, стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин. Затем укладывают пробирку так, чтобы при застывании получился комбинированный столбик. Первоначальный цвет среды фиолетовый (зеленый), при разложении углеводов цвет меняется на желтый. Газообразование определяется по разрыву агара. При посеве сапрофитов (кишечной палочки) вся среда изменит цвет на желтый. При посеве патогенной флоры столбик меняет цвет на желтый, скошенная часть не изменит цвет.

Все кишечные микроорганизмы расщепляют глюкозу и не расщепляют сахарозу. Лактозу расщепляют только не патогенные кишечные.

Среда Олькеницкого. Используется для определения сальмонелл. Цвет — красный, содержит глюкозу, сахарозу, лактозу, ацетат свинца, мочевина. При посеве сапрофитов вся среда изменит цвет на желтый (произойдет расщепление углеводов). При посеве патогенной флоры столбик — желтый, скос — красный (шигеллы или ирсинии); или столбик желтый, с черной полосой в верхней части, скос — красный (сальмонеллы).

Дата добавления: 2013-12-13