Техника пересева микробной культуры

Выращивание культур

После завершения посева необходимо подписать пробирки соответствующими номерами и поставить в один штатив. Все штативы и чашки с посевами ставят на лоток и только в нем переносят к термостату. Инкубация посевов в термостате при 37°С обычно занимает 18-20 часов. Чашки Петри с посевами помечают со стороны дна и кверху дном ставят на полку термостата, чтобы образовавшиеся капли конденсата с крышки не попали на посев.

В процессе термостатирования на средах вырастает микробная культура. Для дальнейшего изучения ее и выделения чистой культуры, то есть микробов одного вида, применяют различные методы пересева.

В пробирки, штрихом на скошенный агар. С чашки Петри с культурой, бактериальной петлей, с соблюдением правил асептики, легким скользящим движением, не травмируя поверхность агара, снимают часть изолированной колонии. Затем вносят бак.петлю с культурой в пробирку со скошенным агаром до границы конденсата и проводят зигзагообразные движения снизу вверх по поверхности агара.

Нельзя касаться стенок пробирки бактериальной петлей и погружать ее в агар. Бак.петля должна скользить по поверхности среды. На всех этапах пересева необходимо соблюдать правила асептики.

В пробирки, уколом в столбик агара. Бактериальной петлей с микробной культурой прокалывают столбик агара и резким движением вынимают петлю по уколу.

В пробирки, в комбинированный столбик. Для изучения ферментативной активности микробов проводят комбинированный посев в среду, разлитую высоким столбиком со скошенной частью. Культуру засевают зигзагообразными движениями по скошенной части от конденсата, а затем — уколом в центр столбика.

В пробирку с жидкой средой пересев проводят так же, как первичный посев.

Из пробирки в пробирку. При обучении этот пересев выполняют в два этапа: сначала забирают культуру из пробирки, а затем пересевают ее на питательную среду в другой пробирке, соблюдая правила асептики. Более опытные лаборанты сеют одновременно, держа в левой руке две пробирки вместе.

При пересевах на скошенный агар в пробирках, их располагают посевной поверхностью кверху.

В чашки Петри на секторы. Чашку Петри со стерильной плотной питательной средой со стороны дна расчерчивают на секторы. Пересев культуры производят зигзагообразными движениями от края сектора к центру. При этом нужно следить, чтобы штрихи не заходили на соседний сектор.

Посев газоном (капельным методом). Для пересева культура должна находится в жидкой среде. В стерильную пустую чашку Петри вносим пипеткой определенный объем, обычно 1 мл микробной культуры. Заливаем чашку остуженным до 45°С МПА (10-12 мл) и перемешиваем легким покачиванием и вращением чашки. Оставляем чашку на столе до застывания среды. Можно предварительно расплавленную и остуженную до 45°С агаризованную среду внести в пробирку с культурой, а затем взвесь быстро вылить на дно чашки Петри и оставить до застывания.

Посев газоном. Культуру в жидкой среде объемом 1 мл наносят пипеткой на поверхность агаризованной среды в чашке Петри и равномерно распределяют легким покачиванием чашки, далее чашку наклоняют и пипеткой удаляют избыток культуры. Пипетку с культурой помещают в склянку с дезинфицирующим раствором.

Посев по методу Шукевича. Определяют присутствие в материале протея. Берут 0,1 мл взвеси материала и не касаясь поверхности агара (т. е. повернув скошенную часть вверх) засевают в конденсационную воду. При наличии протея после термостатирования на поверхности скошенного агара появляется ползучий, вуалеобразный рост микробов.

Дата добавления: 2013-12-13