Выделение анаэробов

Чашечные среды

Питательные среды для выращивания анаэробов

Пробирочные среды закрываются резиновыми пробками.

Среда Китта-Тароцци (жидкая, коричневая) — среда накопления и выделения чистой культуры. Состав: питательный бульон с 3 кусочками сырой бычьей печени. В пробирку наливают 8 мл бульона, добавляют кусочки печени, заливают вазелиновым маслом, закрывают резиновой пробкой и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 20 мин. Перед посевом среду регенерируют кипячением 20 минут. После посева пробирку охлаждают. Рост анаэробов характеризуется помутнением среды.

Среда Вильсона-Блера (плотная, готовая, желтая, высокий столбик) — для первичного посева. Состав: питательный бульон, 1% глюкозы, сульфит натрия и хлорное железо. Расплавленной и горячей (70ºC) средой Вильсона-Блера заливают внесенный в пробирку материал высоким столбиком. Пересевы делают уколом в высокий столбик. После посева среду охлаждают под холодной водой. Колонии — черные, образуются внутри агара в виде чечевицы.

Сахарный агар. Состав: питательный агар + 1% глюкозы (цвет — желтый).

Кровяной агар с глюкозой (агар Цейсслера, цвет — красный).

Тиогликолевая среда (цвет — желтый) (аналог Китта-Тароцци, чаще всего жидкая).

ГЭСПЭК упакованные готовые пробирочные среды лишенные кислорода.

Посевы на чашки осуществляются методом Фортнера, Штурм и др. После посева зазор между крышкой и дном чашки заливают парафином, либо обматывают изоляционной лентой. Все посевы помещают в анаэростат и ставят его в термостат.

1 этап. Первичный посев исследуемого материала — в пробирки с жидкой средой Китта-Тароцци (материал вводится шприцом) и со средой Вильсон-Блера (исследуемый материал заливается горячей средой высоким столбиком). Помещают в анаэростат. После термостатирования при 37ºC в течение 48 часов для получения изолированных колоний делают пересевы на плотные питательные среды (Вильсона-Блера — уколом в высокий столбик, на чашки с агаром Цейсслера). Посевы помещают в анаэростат и термостатируют при 37ºC 24-48 часов.

2 этап. Чистую культуру получают на среде Китта-Тароцци путем пересева в нее части колонии с плотны сред.

3 этап. Идентификацию анаэробов проводят с чистой культурой, выросшей на среде Китта-Тароцци.

Дата добавления: 2013-12-13