Изменения индивидуальных генов (внутригенные изменения)

Изменение числа и порядка расположения генов (перестройка хромосом

Изменение числа хромосом

Наследственное изменение генотипа.

Мутации различают цитоплазматические (внехромосомные) и ядерные

(хромосомные).

Наследственные изменения называются мутациями в геноме, но есть и внехромосомные изменения. Таким образом мутации проявляются на субклеточном и молекулярном уровне. Хромосомные мутации включают три основны типа:

ведет к структурным изменениям)

В селекции микроорганизмов основное значение имеют два последних типа мутаций.

Важной характеристикой мутантов является их способность к реверсии, то есть возвращения к исходному фенотипу (обратное мутирование).

Мутанты, которые появляются в результате реверсии называются ревертантами

Современная селекция основана на выделении клоновых культур. Определение клона: клон – это генетически однородное потомство одной клетки (это колония, выросшая из одной клетки). Клоновая культура, имеющая наследственную однородность, называется штаммом.

Типы мутаций.

1. Делеция (стирание) – выпадение участков хромосомы или нескольких

генов.

2. Дупликация – удвоение генов.

3. Амплификация – умножение отдельных генов или группы генов.

4. Транспозиция - вставка участка хромосомы в новые места на хромосоме.

5. Инверсия – изменение порядка расположения генов на хромосоме, при этом может быть утрата одних функций и приобретение новых.

6. Летальные мутации – это мутации, захватывающие слишком большие участки генома, в результате чего организм погибает.

7. Внутригенные мутации:

• точечные – изменение последовательности нуклеотидов в пределах одного гена.

• транзиция или трансверсия – выпадение или вставка одного или нескольких оснований, например, транзиция – пурин замещается на пурин или пиримидин на пиримидин, трансверсия – пурин замещается на пиримидин.

Точечные мутации приводят к замене одной аминокислоты в белке на другую или к изменению конформации белковой молекулы, что может привести к потере активности фермента. Если белок регулятор или репрессор, то это может привести к повышению выработки целевого продукта продуцентом.

Вывод: совершенствование биообъекта – это получение биообъектов –

продуцентов с мутациями в геноме, которые отличаются от исходного

биообъекта в сторону улучшения биотехнологических свойств, в

частности, в сторону увеличения образования целевого продукта.

Классификация биообъектов и возможности целевого воздействия на

них

1. Макрообъекты: человек, млекопитающие, рептилии, рыбы, насекомые,

растения

2. Микрообъекты:

2.1.Эукариоты – низшие грибы, водоросли (кроме нитчатых)

2.2.Прокариоты – актиномицеты, бактерии, сине-зеленые водоросли.

2.3.Микробиосистемы – ферменты, протопласты.

Человек: у него можно воздействовать только на отдельные гены, но против

использования человека как биообъекта в плане мутагенного действия

возражает этика.

Человека можно подвергать только ненаследственной иммунизации.

Человека можно использовать:

1. донор крови – необходимо, чтобы человек был здоров, кровь не должна быть заражена, при взятии крови не должен нарушаться гомеостаз.

2. донор органов и тканей (после его смерти).

Человек являет пример, какие продукты можно получать (интерферон, инсулин, гормоны внутренней секреции, разнообразные факторы роста).

Вопрос этики препятствует совершенствованию человека как биообъекта.

Млекопитающие: совершенствование млекопитающих как биообъектов сомнительно, хотя в принципе, можно добиться увеличения продукции инсулина поджелудочной железой свиней или крупного рогатого скота.

Рептилии: яд змей лучше собирать весной.

Растения: селекция и отбор – единственный путь их совершенствования до настоящего времени. Чтобы увеличить выход целевого продукта сегодня используют культуры растительных клеток - получают биоженьшень, сердечные гликозиды и др.

Эукариоты и прокариоты: главные успехи при селекции и отборе получены у микроорганизмов, т.к. они легко размножаются, имеют большое количество мутантов и легче отбирается биообъект с интересующими биотехнолога свойствами. Методом отбора и мутагенеза было достигнуто повышение активности у продуцента пенициллина с 40-х годов в 100 000 раз, стрептомицина в 20 000 раз. Те же результаты получены в работе с

продуцентами витаминов и аминокислот.

Существуют традиционные методы совершенствования:

Естественный отбор –селекция.

Нормальная популяция м/о гетерогенна: «+» вариант несет желательный признак», «-» - вариант не несет нужного признака.

Вариации обусловлены спонтанными мутациями (неконтролируемые, внезапные или причины которых не установлены). Например, высевают на чашку Петри культуру жрожжей как нужный продукт, они образуют крупные и мелкие колонии. Нас интересуют мелкие колонии и их пересевают, они снова разделяются на крупные и мелкие колонии и эту операцию повторяют несколько раз. Это есть пример многоступенчатого естественного отбора. В результате у первичных колоний и колоний, получаемых после отбора обнаруживается разное соотношение «+» и «-» вариантов (+80/-20) и (+60/-40).

У многих м/о существует система репарации или возврата - это обратная мутация или возврат к исходному дикому штамму. Если эта система имеется у м/о, то для преодоления этого явления необходимо

1. отбирать по нужному биотехнологическому признаку

2. отбирать по дефекту репарирования.

Индуцируемый мутагенез - путь совершенствования биообъектов

радикальными методами. К таким методам относятся:

- обработка биообъекта химическими мутагенами, нацеленными на ДНК или ДНК-тропными агентами. После этой обработки число мутантов резко возрастает, как «положительных» так и «отрицательных». При этом у части мутантов резко изменяются признаки, причем, чем больше доза мутагена, тем больше и летальных, не нужных мутантов, но одновременно и больше процент выживших мутантов. Необходимо, чтобы сохранялся баланс между летальными мутациями и количеством выживших мутантов.

1. Химические мутагены:

а) нитрозогуанидин – алкилирует основания в репликативной вилке, вызывает

мутации по типу трансверсии, транзиции и делеции,

б) нитрозометилмочевина – вызывает трансверсию

в) акридиновые красители (акридиновый оранжевый) – вставка другого гена между основаниями

г) некоторые противоопухолевые антибиотики, которые являются ДНК-

тропными агентами.

2.Физические мутагены:

а) УФ- облучение, при этом образуются димеры пиридиновых оснований, идут мутации по типу транзиции и трансверсии. Изменяется порядок считывания генов на уровне трансляции.

б) рентгеновское облучение

в) быстрые нейтроны

г) g-лучи (Со)

д) ультразвук.

Мутационно-ступенчатый отбор – при этом отборе повышается частота мутаций. С помощью этого метода удалось добиться увеличения активности продуцента пенициллина в 100 000 раз за счет амплификации (умножения) генов, кодирующих образование LLD- трипептида, увеличивается производство пенициллина, а также нарушается система ретроингибирования,повышается проницаемость стенки.

Дата добавления: 2013-12-13