Химические методы стерилизации

Используются при обработке приборов, аппаратов, сложных оптических систем, крупногабаритных изделий или изделий из титана, полимерных смол, резин.

Для газовой(холодной) стерилизации используют герметичные контейнеры с парами окиси этилена, формальдегида или специализированными многокомпонентными системами.

Для химической стерилизации растворами применяются основных четыре группы веществ:

· Кислота+окислитель(например «Первомур»)

· Альдегид(например формалин)

· Детергент(например хлоргексидина биглюконат)

· Галоид(например Повидон-йод)

Концентрации и время стерилизации зависит от используемого антисептика или дезинфектанта.

9,

Питательная среда — вещество или смесь веществ, применяемая для культивирования макро- и микроорганизмов. Существует множество стандартных биологических питательных сред.

· быть питательными, то есть содержать в легко усвояемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать.

Раство́р — гомогенная (однородная) смесь, состоящая из частиц растворённого вещества, растворителя и продуктов их взаимодействия. "Гомогенный" - значит, каждый из компонентов распределён в массе другого в виде своих частиц, то есть атомов, молекул или ионов

10,

Синтетические среды — это такие среды, в состав которых входят только определенные, химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды следует готовить на дистиллированной воде.

Синтетические питательные среды

среды с известным количественным и качественным составом ингредиентов. Они обычно состоят из аминокислот, аммонийных, азотнокислых и др. солей, углеводов, ростовых факторов и стимуляторов роста. Полусинтетические среды, кроме синтетической основы, содержат незначительное количество кислотного, триптического, дрожжевого, грибного, казеинового гидролизата, альбумина или нативной с-ки крови. С.п.с. применяют в производственных условиях, для изучения питательных потребностей, выращивания к-р клеток.

11,

Натуральными (Естественными) обычно называют среды, которые состоят из продуктов животногоили растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный химический состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений,животные ткани, солод, дрожжи, овощи, навоз, почва, вода морей, озер и минеральных источников. Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. На естественных средах хорошо развиваются многие микроорганизмы, так как в этих средах имеются, обычно, все компоненты, необходимые для роста и развития.

12,

Факторы роста

необходимые для роста и размножения микроорганизмов вещества, к-рые не синтезируются самим организмом, вследствие чего они должны поступать в микробные клетки в готовом виде. Принадлежат к аминокислотам, пуринам, пиримидинам, нуклеотидам, нуклеозидам, витаминам, особенно групп В и К, жирным к-там.

13,

Дифференциально-диагностические среды — специальные смеси питательных веществ, применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их свойств. При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов.

14,

накопительные среды – среды, предназначенные для обогащения конкретного вида микроорганизмов.

15,

Биологический микроскоп представляет собой оптический прибор, предназначенный для получения сильно увеличенных изображений малых организмов и структур растительных и животных тканей, невидимых невооруженным глазом. Свойство микроскопа изображать объект минимальных размеров называется его разрешающей способностью. Она определяет то наименьшее расстояние, на котором два рядом расположенных элемента структуры могут еще быть видимы раздельно.

16,

Свойство микроскопа изображать объект минимальных размеров называется его разрешающей способностью. Она определяет то наименьшее расстояние, на котором два рядом расположенных элемента структуры могут еще быть видимы раздельно.

Рис. 1. Микроскоп:

1 — окуляр; 2 — монокулярная насадка; 3 — револьверное устройство; 4 — объектив; 5 — предметный столик; 6 — конденсор; 7 — корпус коллекторной линзы; 8 — патрон с лампой; 9 — шарнир; 10 — рукоятка перемещения кронштейна конденсора; 11— рукоятка тонкой фокусировки; 12 — рукоятка грубой фокусировки; 13 — тубусодержатель; 14 — винт для крепления насадки

17,

Микроскопия (МКС) (греч. μικρός — мелкий, маленький и σκοπέω — вижу) — изучение объектов с использованием микроскопа. Подразделяется на несколько видов: оптическая микроскопия, электронная микроскопия, многофотонная микроскопия, рентгеновская микроскопия, рентгеновская лазерная микроскопия и предназначается для наблюдения и регистрации увеличенных изображений образца.

18,

Иммерсионная микроскопия (от лат. immersio — погружение) — метод микроскопического исследования малых объектов с помощью погружения объектива светового микроскопа в среду с высоким коэффициентом преломления, расположенную между микроскопическим препаратом и объективом.

§ Для проведения исследований используют специальные иммерсионные объективы (объективы для масляной иммерсии имеют чёрную полосу на оправе, вблизи от фронтальной линзы; объективы для водной иммерсии — белую полосу).

§ Иммерсионным называется объектив, в котором между фронтальной линзой и препаратом помещают каплю иммерсионного масла. Оптический коэффициент преломления иммерсионного масла близок к коэффициенту преломления стекла (1,52). Благодаря этому сохраняются и проходят через фронтальную линзу объектива лучи, которые вследствие преломления (на границе стекло препарата — воздух) рассеялись и отклонились. При этом уменьшилась бы освещенность поля зрения. Увеличения иммерсионных объективов обозначают целыми числами (40, 90, 100), а в некоторых системах микроскопов — дробями 1/12, 1/18 соответствующими фокусным расстояниям в английских дюймах или в миллиметрах

19,

Рис. 1. Микроскоп:

1 — окуляр; 2 — монокулярная насадка; 3 — револьверное устройство; 4 — объектив; 5 — предметный столик; 6 — конденсор; 7 — корпус коллекторной линзы; 8 — патрон с лампой; 9 — шарнир; 10 — рукоятка перемещения кронштейна конденсора; 11— рукоятка тонкой фокусировки; 12 — рукоятка грубой фокусировки; 13 — тубусодержатель; 14 — винт для крепления насадки

20,

Правила работы с микроскопом:

Для освещения микроскопа следует пользоваться искусственным освещением.

1.1 Освещение поля зрения искусственным источником света.

1.2 Повернуть зеркало вогнутой стороной.

Вращая рукой револьвер, поставить на центральную оптическую ось малое увеличение (объектив 8), подвести объектив под тубус. Щелчок говорит о том, что объектив закреплен на оптической оси.

Открыть диафрагму осветителя, слегка поднять конденсор, установить зеркало так, чтобы источник света был виден на середине фронтальной линзы объектива.

Смотря в окуляр, уловить зеркалом лучшую освещенность поля зрения; если поле зрения излишне освещено, слегка прикрыть диафрагму или опустить конденсор.

1.2. Установка препарата на фокус. Поставить на столик микроскопа препарат и зажать его клеммами.

Наблюдая сбоку, опустить объектив с помощью макрометрического винта почти до препарата.

Смотря в микроскоп, медленно поднимать тубус до появления отчетливых контуров препарата. Уточнить фокус вращением микрометрического винта не более чем на один-два полных оборота в одну или другую сторону.

При равномерном и полном освещении рассмотреть несколько полей зрения препарата, передвигая столик. Повернуть револьвер, подвести под тубус среднее увеличение (объектив 40, 60), установив его на оптической оси (должен быть щелчок).

Наблюдая сбоку, опустить объектив близко к препарату, но не касаясь его. Глядя в окуляр, медленно поднимать тубус до появления контуров препарата. Уточняя видимость микрометрическим винтом, установить фокус и рассмотреть препарат.

Нанести на препарат небольшую каплю иммерсинного масла. Повернуть револьвер и установить (должен быть щелчок) на центральной оптической оси иммерсионный объектив (90).

Наблюдая сбоку, погрузить иммерсионный объектив в каплю масла, почти соприкасаясь линзой с предметным стеклом препарата. Смотря в микроскоп, осторожно и медленно поднимать тубус, вращая микрометрический винт на себя (не отрывая объектива от масла), до появления контуров препарата. Уточнить фокус микрометрическим винтом. Рассмотреть в препарате несколько полей зрения, передвигая столик боковыми винтами. Сравнить изображения препарата при пользовании сухим объективом и иммерсионным.

Вычислить увеличение микроскопа для данного объектива и окуляра.

После окончания работы микроскоп следует обтереть тряпкой, а объективы (иммерсионные) — мягкой тряпкой, слегка смоченной в спирте. Микроскоп убрать на место, где он хранится.

Предметные стекла с отработанными препаратами опустить в банку с дезинфицирующим раствором.

21,

В зависимости от характера исследуемого объекта, используются различные типы препаратов^[3].

§ Тотальные препараты. Приготовляются из мелких организмов или небольших их частей. Часто требуют дополнительной обработки в просветляющих растворах. Обезвоженные тотальные препараты могут заключаться в постоянные среды.

§ Мазки. Применяются в гематологии при изучении крови, для изучения бактерий и простейших. Могут приготавливаться из тканевых элементов.

§ Влажные мазки фиксируют, не давая исследуемому материалу высохнуть. Затем препарат готовят так же, как наклеенные на стекло срезы.

§ Сухие мазки высушивают не фиксируя.

§ Срезы изготавливаются из фиксированных и залитых в пластический материал (парафин, акрил) объектов на микротоме. Для быстрого получения срезов без длительной процедуры обезвоживания применяют замораживающий микротом.

§ Шлифы приготовляются из материалов, не поддающихся резке на микротоме. Используются преимущественно в петрографии.

22,

Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для микроскопического изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, клеток культуры тканей, простейших, ряда водорослей и других мелких организмов.

Для приготовления препаратов по методу раздавленной капли на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости.

Стеклянной палочкой или бактериологической петлей в каплю вносят небольшое количество исследуемой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси.

Если суспензия клеток слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. Для этого обычно к 4,5 мл воды, физиологического раствора или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии клеток и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исходной суспензии. При необходимости можно получить более высокие разведения (1:100—1:1000 и т. д.);

приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха.

Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно убрать узкой полоской фильтровальной бумаги.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах.

23,

«Висячая капля» — метод микроскопирования живых бактерий при физиологических условиях роста; позволяет несколько дней наблюдать объект. Для приготовления висячей капли берут пинцетом покровное стекло, проводят через пламя и остужают. В центр стекла наносят каплю исследуемого материала, взвешенного в изотоническом растворе хлорида натрия. Затем покровное стекло быстро поворачивают каплей вниз и кладут на стерильное предметное стекло с вышлифованной посредине лункой, края которой предварительно смазывают вазелином. Можно наложить предметное стекло на покровное и перевернуть: капля оказывается висящей в герметически изолированном пространстве (рис. 2). При слабом увеличении и суженной диафрагме микроскопа находят край капли, далее исследуют препарат при более сильном увеличении. Этот метод позволяет наблюдать подвижные формы микроорганизмов – наблюдать в динамике процессы роста и клеточного деления клеток и т.д.

24,

Для витального (прижизненного) крашения применяют 0,2-0,001 % водные растворы метиленового и толуоидинового синего, нейтральрот и конго красный, которые добавляют в придавленную или висячую капли культуры. Этим способом выявляют спирохеты, простейшие, определяют подвижность бактерий, иммунное набухание капсулы, но использование его требует строгого соблюдения правил, исключающих лабораторное заражение.

Дата добавления: 2014-01-04