Микроскопирование методами раздавленной капли и прижизненной окраски микробов

Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для микроскопич. изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, к-к культуры тканей, простей-ших, ряда водорослей. Для приготовления препаратов по этому методу на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палоч-кой или бакте-риологич.петлей в каплю вносят небольшое кол-во исследу-емой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тка-ней на предметное стекло наносят каплю суспензии к-к в культуральной жидкости. Если суспензия к-к слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. К 4,5 мл воды, физиологического р-ра или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии к-к и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исход. суспензии. Можно получить более высокие разведения (1:100—1:1000); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги. Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнополь-ную или фазово-контрастную микроскопию. Т.к. при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1—1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела. Прижизненная окраска – метод явл. видоизменён. методом раздавленной капли, для лучшей видимости микробов прокраш. р-ром метиленовой сини или нейтр. красного (под покровное стекло). Бактерии сохраняют жизнеспособность, приобретают син. или красную окраску, отчётливо видны под микроскопом.

43Метод окраски и фиксации препарата. Фиксация – обработка живого объекта, к-рая даёт возможность быстро прервать течение жизненных процессов в нём, сохранив тонкую структуру. Ф-ия необходима при работе с патогенными м-ми для безопасности.Приготовление мазка. На чистое обезжиренное стекло нанести каплю воды, прокалённой бактериологической иглой из пробирки с культурой берут микробную массу и вносят в каплю. Каплю размазывают по стеклу на площади 4 см.. густую массу сначала разводят водой. Мазок сушат на воздухе или при нагревании над пламенем горелки. Затем фиксируют. Фиксация мазка.•Над пламенем горелки;•Использование формалина, ацетона, хромовых соединений;•Обработка 96 этил. Спиртом или смесью спирта и эфира (жидкость Никифорова), препараты погружают в фиксирующую жидкость. Окраска препарата. На мазок наносят несколько капель красителя (кислые и основные красители: нейтральный красный, фуксин, метиленовый синий, генциан фиолетовый, др). В зависимости от вида красителя продолжительность окрашивания от 1 до 5 мин. Промыть под водой, фильтровальной бумагой удалить воду, подсушить на воздухе и микроскопировать.

44Техника и механизм окраски б-ий по Граму. Метод основан на свойстве Гр- м-ов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и докрашиваться в дальнейшем в оранжево-красный.•Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают 1% водным р-ром генциан фиолетового на 1мин. •Бумагу снимают, препарат промывают под проточной водой и заливают р-ром Люголя на 1-2 мин до почернения мазка.•Р-р Люголя смывают и приступают к обесцвечиванию препарата в 96 этиловом спирте на 1мин.•Промывают водой и наносят водный р-р нейтрального красного на 1-2 мин.Смывают, высушивают, микроскопируют (с использованием иммерсии при увеличении объектива 90).

1. Понятие о микроорг-х. Осн. напр. совр. микроб-и…

2.Чистые и накопительные культуры микроорг-в. Рост…

3. Типы пит. сред и усл. роста микроорг-в.

4. Периодическое культивирование

5. Непрерывное или проточное культивирование.

6. Культивирование иммобилизационных к-к

7. Особенности стр. к-к эукар. и прокар.Размеры,формы..

8. Строение и хим. состав клеточ. стенки бактерий

9. Стр. и функ. ЦПМ, её производные в бакт. к-ке

10. Цитоплазма бактер. к-ки. Нуклеоид, плазмиды, роль..

11. Включения бактер. к-ки. Запасные ве-ва бакт. к-ки.

12. Бактер. капсула, ворсинки: строение и значение.

13. Стр. жгутика. Способы движения бактерий.

14. Размножение бактерий

15. Покоящиеся формы у бакт. Образование эндоспор.

16. Фенотипич. и генотип. изменчивость у бакт.Мутации.

17. Конъюгация,трансформация,трансдукция–рекомбин..

18. Химический состав и источники биогенных элементов прокариот.

19. Конструкт. и энергет.метаболизм.Типы пит.прокар-т

20. Особенности бактериального фотосинтеза

21. Аэробное дыхание.

22. Неполное окисление орг. субстратовмикроорг-ми

23. Анаэробное дыхание

24. Общая хар-ка брожения

25. Молочнокислое брожение: химизм, типы, возб., знач.

26. Маслянокислое брожение: химизм, типы, возб., знач.

27. Спиртовое брожение: химизм, типы, возб., знач.

28. Принципы классификации бактерий. Х-ка отделов

Gracilicutes. Firmacutes, Mollicutes, Mendosicutes

29. Процессы трансформации углеродсодержащих в-в.

30. Трансформация азотсод. в-в микроорганизмами

31. Трансформация микроорг-ми соед. фосфора, Se, Fe.

32. Отношение микроорг-в к молекулярному кислороду

33. Влияние на микроорг. влажности и осмот. давления.

34. Влияние температуры на микроорг.

35. Зависимость бакт. от реакции среды

36. Действие лучис. энергиина м/о, гидрост. давл, звука

37. Понятие об антисептиках и антибиотиках…

38. Взаимоотношения микроорганизмов

39. Взаимоотношения микро- и макроорганизмов

40. Методика приготовления элективной натур. жид. пит. среды для выращивания Bacillus subtilis.

41. Методика приготовления элективной культуры Bacillus mesentericus на прир. тв. пит. среде.

42. Микроскопирование методами раздавленной капли и прижизненной окраски микробов.

43.Метод окраски и фиксации препарата.

44.Техника и механизм окраски б-ий по Граму.

Дата добавления: 2014-01-04