Окисление углеводородов чистой культурой микроорганизмов (по Макклангу)

Окисление углеводородов

Вводные пояснения. Широкая механизации сельского хо­зяйства приводит к загрязнению сельскохозяйственных земель значительным количеством углеводородов. Так, керосин и бензин, используемые в тракторных, автомобильных и дру­гих двигателях, мазут и дизельное топливо, применяемые на сельских электростанциях, попадая в почву, приводят к нару­шению ее свойств, ухудшают экологическую ситуацию, а ава­рийные разливы нефти превращают почву в техногенную пус­тыню. Состав нефти и нефтепродуктов характеризуется высо­ким процентом парафиновых, нафтеновых и ароматических углеводородов. В почве эти продукты окисляют микроорганизмы.

Постановка опыта. Для получения накопительной культу­ры углеводородокисляющих бактерий в колбу на 250 мл нали­вают 100 мл жидкой питательной среды (или в колбу на 150 мл — 30 мл среды) следующего состава (%): KNO₃ — 0,4; КН₂РО₄ – 0,06; Na₂HPO₄- 0,06; NaH₂PO₄ • 12Н₂О – 0,14; MgSO₄ · 7H₂O— 0,08; водопроводная вода. рН среды - 7,2— 7,3 — устанавливают по бромтимолблау.

В качестве единственного источника углерода добавляют 2 мл керосина или вазелинового масла. Для заражения среды в колбу помещают ¹/₃ чайной ложки почвы из пробы, отобран­ной у бензоколонки или у гаража. Колбы помещают на качал­ку в термостат при 30 °С на 4—6 сут.

Микроскопирование. Для знакомства с микроорганиз­мами, окисляющими углеводороды, из накопительной куль­туры готовят фиксированный и окрашенный препарат.

Углеводороды хорошо окисляют представители родов Pseudomonas (Р. Аеruginosa, P. putida), Mycobacterium, Arthrobacter и Nocardia.

Для выявления способности чистой культуры микроорганиз­мов разлагать парафин готовят стерильную агаризованную среду следующего состава (г/л дистиллированной воды): NaNO₃ - 2,0; К₂НРО₄ - 1,0; MgSO₄ · 7H₂O - 0,5; FеSO₄ · 7H₂O - 0,01; MnSO₄ · 4H₂O - 0.008; ZnSO₄ · 7H₂O - 0,002; агар - 20.

Расплавленную агаризованную среду разливают в сте­рильные чашки Петри, в которые одновременно вносят сте­рильной стеклянной пипеткой 3—4 капли стерильного рас­плавленного парафина, затем круговыми движениями переме­шивают содержимое чашек. После охлаждении на поверхности остывшего агара образуются островки парафина в виде тонких пленок. На поверхность агара наносят каплю (0,05 мл) густой суспензии чистой культуры бактерий, испытываемой на спо­собность окислять парафин, и размазывают ее стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности агара. Чашки по­мещают вверх дном во влажную камеру и ставят в термостат при 28—30 ºС. После 2—3 недель инкубации микроорганизмы, способные окислять парафин, разрастаются вокруг пленок па­рафина и покрывают их сплошным толстым слоем.

Если вместо чистой культуры микроорганизмов, способ­ных окислять парафин, на поверхность агаровых пластин на­нести каплю почвенной суспензии, то можно выявить формы почвенных микроорганизмов, способные окислять парафин.

Материалы и оборудование (к 7.2.3 и 7.2.4)

Основная жидкая питательная среда для накопительной культуры (без источника углерода, склянка с керосином или вазелиновым маслом, почва, колбы на 250 и 100 мл, цилиндр на 100 мл, алюминиевая чай­ная ложка, вата для пробок, пипетки Мора на 1 мл. Стерильная агаризованная среда Маккланга, стерильный парафин, стерильные чаш­ки Петри, стерильная водопроводная вода — 100 мл, шпатели, чистые культуры микобактерий или нокардий, окисляющих парафин. Мик­роскопы и все необходимое для микроскопирования.

Дата добавления: 2014-01-04