Определение титра кишечной палочки Eschenchia coli (coli-титра, титра коли)

Определение общего количества бактерий в молоке

Вначале готовят разведения (10^-1 — 10^-9), для чего из отобран­ной пробы молока стерильной пипеткой берут 1 мл и перено­сят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды (техни­ку приготовления разведений см. в 5.1.1). Затем при глубинном посеве из разведений молока, обесцвечивающегося с резазури­ном менее чем через 20 мин, т. е. разведений 10^-4; 10^-5 и 10^-6, берут отдельной стерильной пипеткой по 1 мл суспензии и вносят в стерильные чашки Петри в двух- и трехкратной повторности.

При обесцвечивании молока с резазурином более чем че­рез 20 мин посев делают из разведений 10^-3, 10^-4, 10^-5. В чаш­ки с суспензией вносят расплавленный и охлажденный до 45— 50°С МПА. Суспензию с агаром перемешивают и чашки Пет­ри с посевом помещают в термостат при 28—30°С. После 2-дневной инкубации подсчитывают колонии бактерий в чаш­ках. Количество дрожжей и плесневых грибов подсчитывают на 4-й день. Число колоний умножают на степень разведения и определяют среднее арифметическое их число после учета колоний в трех чашках. Это соответствует числу клеток в 1 мл молока.

При оценке качества молока определение титра коли имеет важное значение, так как кишечная палочка — обитатель ки­шечника человека и животных и ее присутствие в молоке ука­зывает на фекальное загрязнение молока.

Коли-mump — это наименьший объем (в мл) или масса (в г) исследуемого материала, в котором обнаруживается хотя бы одна клетка кишечной палочки.

Для выявления кишечной палочки и определения ее тит­ра в молоке используют газообразующую способность группы бактерий Е. coli-aerogenes на жидкой среде Булира следующего состава: МПБ — 1 л, маннит — 10 г, NaCl — 5 г.

Насыщенным раствором соды устанавливают нейтраль­ную реакцию среды, затем подкрашивают ее насыщенным вод­ным раствором нейтральрота до вишнево-красного цвета фильтруют, разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют в автоклаве при 1 атм.

В пробирки со средой Булира вносят по 1 мл суспензии из соответствующего разведения. Посев проводят из всех разведений в двух- и трехкратной повторности. Пробирки с посе­вом выдерживают 48 ч при 42°С.

В связи с тем что в пробах молока могут быть другие бактерии, сбраживающие лактозу с образованием газа, точно установить наличие кишечной палочки можно, сделав посев из сбродившей жидкости на специфическую среду Эндо. Если бродильная проба положительная и культура на среде Эндо да­ст ярко-красные колонии, то в исследуемом субстрате присут­ствует кишечная палочка. Для полной идентификации нужны дополнительные данные: об отсутствии разложения желатины, об отсутствии газа и кислоты при выращивании на сахарозе и об образовании скатола и индола и МПБ.

Коли - титр молока можно определить на среде Кесслера, в состав которой входят желчь, краситель генциановый фиолетовый — вещества, подавляющие рост молочнокислых и других грамположительных бактерии.

Молоко или молочные продукты вначале разводят в со­отношении 1: 10, 1: 100 и т. д. Затем берут 6 пробирок со сре­дой Кесслера (среда 9, см. 14.2.3): и три из них вносят по 1 мл, в остальные — по 0,1 мл каждою разведения. Засеянные про­бирки ставят на 2 сут в термостат при температуре 43°С. От­сутствие газообразования во всех 6 пробирках указывает на чис­тоту продукта, и при этом принято считать, что его коли - титр выше 3 м л; при газообразовании в одной пробирке, засеянной 1 мл исследуемого продукта, коли – титр равен 3 мл; при образовании газа более чем в одной пробирке с 0,1 мл разведения молока коли - титр считается равным 0,3 мл. Такое молоко непригодно к употреблению. При образовании газа в 6 или 5 пробирках с 0,1 мл разведения молока (очень загрязнённое молоко) — коли – титр менее 0,3 мл.

Идентификацию кишечной палочки в этом случае также проводят на среде Эндо, для чего высевают на нее суспензию из газообразующих пробирок и ставят их на 1 сут в термостат при температуре 37°С.

На основании определения титра кишечной палочки ка­чество молока подразделяют на классы (табл. 6).

Таблица 6 - Определение качества молока по коли – титру

Показатель	Класс
1-й	2-й	3-й	4-й
Коли – титр	10^-1	10^-2	10^-3	10^-5
Качество молока	Хорошее	Среднее	Плохое	Очень плохое

Дата добавления: 2014-01-04