Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

Осаждение белков солями тяжелых металлов.

Осаждение белков при нагревании.

Реакции осаждения белков.

Нингидриновая реакция.

Реакция Адамкевича.

Реакция Миллона.

Цветные реакции на белки.

Реактив Миллона состоит из нитратов ртути (I) и (II) в HNO₃ с примесью HNO₂. Реакция реактива Милона с белками обусловлена присутствием в них остатка тирозина.

В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и 0,5 мл реактива Миллона. Образуется белый осадок под действием соли ртути и азотной кислоты, входящих в состав реактива Миллона. При нагревании осадок окрашивается сначала в розовый, а затем в коричнево-красный цвет.

Реакция обусловлена присутствием в белке остатков аминокислоты триптофана.

К 1 мл сыворотки добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты (содержит примесь глиоксилевой кислоты) и нагревают до растворения белка. Содержимое пробирки охлаждают и, наклонив пробирку, осторожно по стенке наслаивают 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев жидкости возникает красно-фиолетовое окрашивание. При нагревании окрашивание появляется быстрее.

Реакция обусловлена наличием в белке остатков α-аминокислот.

+ R-СОН + СО₂ + NН₃

В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют 5 капель 0,2% раствора нингидрина и нагревают. Через несколько минут наблюдают появление сине-фиолетового окрашивания.

2.4. Реакция Шульце – Распайля.

Реакция Шульце - Распайля обусловлена наличием в белке остатков триптофана. Они, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом, дают продукты конденсации, окрашенные в вишнево-красный цвет. Оксиметилфурфурол образуется из фруктозы в присутствии концентрированной серной кислоты:

К 0,5 мл сыворотки добавляют 1-2 капли 10% раствора сахарозы и по стенке пробирки наслаивают 1 мл конц. серной кислоты. Слегка встряхивают пробирку. На месте соприкосновения воды и кислоты появляется вишнево-красное окрашивание.

В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и нагревают. Наблюдают появление опалесценции. При кипячении может выпасть осадок.

Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (медь, ртуть, свинец и др.) денатурируют и образуют нерастворимые в воде комплексные соединения вследствие адсорбции тяжелого металла на поверхности белковой молекулы. На этом основано использование белков в качестве противоядия при отравлении тяжелыми металлами.

В две пробирки наливают по 0,5 мл раствора белка. В первую добавляют 2 капли 5% раствора сульфата меди, во вторую – 2 капли 5% раствора ацетата свинца. В обеих пробирках выпадает осадок белка.

Выпадение белка в осадок при взаимодействии с концентрированными минеральными кислотами обусловлено дегидратацией белковых молекул, образованием нерастворимых комплексных солей белка и кислот. В избытке серной и соляной кислот осадок белка растворяется. Избыток азотной кислоты не растворяет осажденный белок. Реакция с азотной кислотой используется при клинических исследованиях мочи на присутствие в ней белка (проба Геллера).

В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты и затем, наклонив пробирку, осторожно приливают по стенке равный объем раствора белка. На границе двух жидкостей появляется белый осадок белка. Встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не исчезает. Повторяют опыт с концентрированными соляной и серной кислотами.

Дата добавления: 2014-01-05