Лекция 15. Химические, количественные методы в цитологии. Рентгеноструктурный анализ

Методы получения изолированных клеточных структур

Изучение биохимических свойств и химического состава клетки осуществляется разнообразными методами, среди которых за последние 10-15 лет широкое распространение получил метол изолированных клеточных структур.

Выделение из клеток ядер, ядрышек, митохондрий и других структурных образований производится путем последовательного (или дифференциального) центрифугирования.

Современные центрифуги - это приборы, обладающие большой мощностью, способные развивать огромную скорость вращения (например, 60000 оборотов в минуту), необходимую для разделения клеток на отдельные фракции, в каждой из которых находятся определенные клеточные структуры.

Перед центрифугированием клетки подвергаются измельчению до такой степени, чтобы получилась однородная масса -- гомогенат. Получают гомогенат в специальном приборе - гомогенизаторе. Наиболее распространенный гомогенизатор изображен на рисунке а. Ткани и клетки измельчаются в растворе сахарозы, чаще всего 0,25М, который не повреждает клеток. Процесс измельчения - гомогенизация проводится при температуре 0-4° С.

Полученный гомогенат подвергается последовательному центрифугированию для того, чтобы разделить его на отдельные фракции.

В основе разделения клеточных структур на отдельные фракции лежит различие в удельном весе этих структур.

Каждая фракция состоит из более или менее однородных структур клеток (6). При относительно небольшой скорости центрифугирования осаждаются ядра, т. е. выделяется фракция ядер, обладающих среди клеточных структур наибольшим удельным весом. Над ядрами располагается более легкая по удельному весу фракция митохондрий, над ними -- еще более легкие по своему удельному весу фракции лизосом, микросом и т. д. В жидкости, которая находится над осадком, остаются только растворимые компоненты клетки, содержащиеся в клеточном соке.

Отдельные клеточные структуры, полученные путем центрифугирования, дальше подвергаются детальному исследованию. Определяются их биохимические свойства, изучаются белки, нуклеиновые кислоты, ферменты и другие вещества, входящие в состав ядер, цитоплазмы и различных органоидов клетки.

План:

1. Методы микрохимического и ультрамикрохимического изучения клетки.

2. Метод рентгеноструктурного анализа

3. Цитохимические или гистохимические методы

4. Метод меченых атомов (авторадиография)

5. Количественные методы в цитологии

6. Цитофотометрия.

Дата добавления: 2014-01-06