Цитогенетические методы

При наследственных заболеваниях, обусловленных хромосомными нарушениями, применяются цитогенетические (на клеточном уровне) методы исследования.

В каждой соматической клетке можно обнаружить характерный для данного человека хромосомный набор (его кариотип), в составе которого насчитываются 23 пары хромосом. Для цитогенетического исследования берутся клетки периферической крови—лейкоциты, которые помещаются в специальную среду. Так как хромосомы становятся видимыми под микроскопом только вначале деления клетки, нужно зафиксировать этот процесс.

Заставить клетки делиться можно, если добавлять в среду, где они находятся, специальные вещества, стимулирующие их митотическое деление. Одно из таких веществ (фитогемагглютинин) выделено из бобов. Оно активно побуждает к митотическому делению клетки. После того как клетки начинают готовиться к делению, в эту же среду добавляют другое вещество, которое останавливает процесс деления клеток на определенной стадии.

В дальнейшем клетки крови помещают на стеклянную пластинку, туда же вводится краситель. Если посмотреть под микроскопом препарат, то можно увидеть окрашенные хромосомы. Вначале подсчитывают число хромосом, затем проводят их типирование, или опознание по специальным признакам, и дается заключение о качественной и количественной характеристике кариотипа человека.

Исследование кариотипа позволяет распознавать заболевания, сопровождающиеся изменением числа половых и соматических хромосом, и обнаруживать видимые структурные изменения отдельных частей хромосом.

При цитогенетическом исследовании соматических клеток женщины обнаруживают глыбку окрашенного вещества, располагающегося в клетке по ее периферии. Называется это вещество половой хроматин. Когда же исследуют соматические клетки мужского организма, то в них половой хроматин не находят.

Происхождение полового хроматина связывают с половой Х-хромосомой. Известно, что из двух Х-хромосом в соматической клетке активной является лишь одна Х-хромосома, а другая — неактивная Х-хромосома превращается в половой хроматин. Отсутствие полового хроматина в соматических клетках у мужчин связано с тем, что в наборе половых хромосом содержится только одна Х-хромосома.

Таким образом путем определения полового хроматина в клетках можно выяснить, какой пол имеет их владелец.

Исследование полового хроматина широко применяется в клинической практике для определения пола обследуемого и уточнения диагноза при хромосомных заболеваниях с нарушением состава половых хромосом. Отсутствие полового хроматина в клетках женщины бывает тогда, когда половые хромосомы в кариотипе представлены одной Х-хромосомой (ХО). Обнаружение нескольких телец полового хроматина возможно, когда в наборе имеются три и больше Х-хромосом (XXX, ХХХХ, …). При обследовании мужчин половой хроматин в клетках обнаруживают только в тех случаях, когда количество Х-хромосом увеличивается.

Так, при наборе XXY выявляется одно тельце полового хроматина, при наборе ХХХУ — два тельца полового хроматина и т. д.

Половой хроматин обычно исследуется в клетках, которые берутся со слизистой ротовой полости путем простого соскабливания с внутренней поверхности щеки. После окрашивания под микроскопом подсчитывают число хроматин-положительных и хроматин-отрицательных клеток.

Методы исследования патологии обмена веществ. Большой удельный вес в диагностике наследственных заболеваний, особенно с нарушением обмена веществ, занимают биохимические исследования. Развитие наследственного дефекта обмена в организме приводит к накоплению продуктов обмена, оказывающих токсическое воздействие на организм. Эти изменения можно обнаружить, проводя биохимические исследования при патологии обмена веществ.

Вся программа обследования включает несколько этапов, которые отличаются глубиной проводимого поиска. На первом этапе применяются качественные пробы на основные дефекты обмена. С этой целью используются биохимические тесты, позволяющие обнаружить в крови, моче больных отдельные продукты извращенного обмена.

На первом этапе обследования применяются также и микробиологические тесты, для которых используют специально выведенные формы бактерий Эти микроорганизмы способны развиваться только при условии, когда в среде, где они находятся, содержится какое-либо определенное вещество, без которого бактерии гибнут и не размножаются. Такими веществами могут быть и продукты нарушенного обмена веществ, которые содержатся в крови больных. Помещая каплю крови, взятой от больного, в среду с культурой этих бактерий, исследователи наблюдают усиление или угнетение их роста, а следовательно, либо подтверждают, либо исключают диагноз данной наследственной патологии обмена.

Указанный метод применяют для массовых обследований людей, среди которых нужно выявить страдающих наследственными нарушениями обмена веществ. Получение положительных проб у больных требует проведения следующего этапа, на котором уже используются более сложные биохимические методы диагностики. Особенностью этих методов является количественная оценка имеющихся нарушений. Сложность, трудоемкость и высокая стоимость исследований не позволяют использовать их широко. Перспективным в этом направлении является внедрение автоматических анализаторов, позволяющих централизованно обследовать большое число больных за короткий промежуток времени. Такие системы уже сегодня используются для анализа аминокислотного состава крови, мочи и других биологических жидкостей.

Выполнение программы второго этапа, наряду с решением диагностических задач, дает возможность контролировать уровень содержания отдельных веществ в организме, уточнять диагноз наследственной болезни обмена веществ и оценивать эффективность проводимого лечения.

Дата добавления: 2014-01-06