Идентификация

Идентификация – определение (установление) видовой принадлежности микроорганизма. В настоящее время общепринятый метод идентификации основан на изучении определенного набора наиболее важных фенотипических признаков исследуемой бактерии. Критерием для идентификации является наличие у микроорганизма совокупности основных признаков, характерных для данного вида (таксономических признаков). Установление вида производится согласно международной таксономической классификации Берги (Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology).

Основными видами идентификации являются:

1. Изучение морфологических свойств (форма, расположение), тинкториальных (особенности окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски), культуральных (особенности роста на питательных средах).

2. Биохимическая идентификация – изучение способности микроорганизмов ферментировать различные химические соединения.

Для изучения биохимической активности бактерий используют следующие реакции: ферментацию, окисление, ассимиляцию (утилизацию), диссимиляцию (деградацию) и гидролиз субстрата. Классический (традиционный) метод идентификации микроорганизмов по биохимическим свойствам заключается в посеве чистой культуры на дифференциально-диагностические среды, содержащие определенные субстраты, с целью оценки способности микроба ассимилировать данный субстрат или определения конечных продуктов его метаболизма. В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением гликолитических (сахаролитических) и протеолитических признаков исследуемых бактерий, если этого достаточно для их идентификации. При необходимости изучают другие свойства: способность к восстановлению нитратов, карбоксилирование аминокислот, образование оксидазы, плазмокоагулазы, фибринолизина и др.

Биохимические тесты 2-го поколения, основанные на применении концентрированных субстратов и более чувствительных методов обнаружения конечных продуктов реакции, позволяют выявлять ферменты уже существующие в микробной клетке, и таким образом, не требуют дополнительного выращивания бактерий. Это позволяет существенно сократить сроки исследования (до 4 часов).

Биохимические тесты 3-го поколения основаны на применении субстратов, меченных хромогеном или флюорохромом. Такой комплекс не окрашен или не флюоресцирует. При разрушении меченного субстрата ферментом микроорганизма освобождается метка, что проявляется окрашиванием или флюоресценцией. Такие тесты позволяют использовать единичную бактериальную колонию, полученную при первичном посеве исследуемого материала на плотную питательную среду.

В лабораторной практике применяются готовые микротест-системы (МТС) для идентификации микроорганизмов. В современных МТС учет результатов и их интерпретация осуществляются автоматически с помощью компьютерных систем анализа.

Наряду с основными методами идентификации могут быть использованы:

1. Сероидентификация (изучение антигенного строения путем постановки различных серологических реакций).

2. Хемоидентификация (идентификация по химическому составу микробной клетки).

Хемоидентификация основана в первую очередь на анализе состава микробных липидов, осуществляемого с помощью метода хроматографии (метод газожидкостной хроматографии).

3. Фагоидентификация (чувствительность к видоспецифическим бактериофагам).

4. Способность к продукции определенных факторов вирулентности.

5. Видовая резистентность к определенным антимикробным препаратам.

6. Молекулярно-генетические методы идентификации, основанные на анализе бактериальных ДНК (рестрикционный анализ, гибридизация ДНК, полимеразная цепная реакция).

Дата добавления: 2014-01-06