КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Определение активности ферментов
О скорости ферментативной реакции судят или по скорости убыли субстрата, или по скорости образования продукта. За единицу активности любого фермента (Е) принимают то количество фермента, которое в оптимальных условиях катализирует превращение 1мкмоля субстрата в 1мин. Существует и другая еденица активности: 1 катал - количество Е, которое катализирует превращение 1моль субстрата в 1 сек. 1 Е фермента = 16,67 нкатал. Для выражения активности фермента используется определение удельной и молекулярной активности. Удельная активность - число Е ферменттивной активности в расчёте на 1мг белка. Чем выше степенб очистки фермента, тем выше удельная активность. Число оборотов фермента (молекулярная активность) -число молекул субстрата, подвергающихся превращению одной молекулой фермента в 1 мин. Число оборотов широко варьирует, например: 1) Карбонгидраза (катализирует перенос Н2СО3) совершает 36000000 оборотов /мин 2) Каталаза (Н2О2 ---- О2 + 2Н2О2) совершает 4000 оборотов / мин 3) Фосфоглюкомутаза – 1240 оборотов / мин Для качественного обнаружения и количественного определения активности сложных ферментов используют следующие методы: ЛДГ Лактат ---------- ПВК НАД НАД*Н2 + Н НАД*Н2 интенсивно поглощает свет. По излучению ПВК можно судить о НАД*Н2. На 1 молекулу лактата образуется 1 молекула НАД*Н2. НАД*Н2 интенсивно флюоресцирует. Интенсивность флюоресценции будет пропорциональна концентрации.
10. ЛОКАЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ В КЛЕТКЕ, МАРКЁРНЫЕ И ОРГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ. Все ферменты и метаболиеские процессы компартментализованы (раздельны и изолированы). В нормальной клетке находится около 1000 ферментов. Упорядоченное взаимодействие ферментов достигается путём многоуровневой регуляции и компартментализации. Зная локализацию ферментов в клетке и определяя их активность в крови, можно судить о степени деструкции ткани.
Ядро: локализованы РНК – полимеразы, НАД – синтетаза, ферменты, участвующие в репликации ДНК. Митохондрии: ферменты тканевого дыхания, окислительного фосфорилирования, ферменты в- окисления жирных кислот, цикла Кребса, синтеза мочевины. Лизосомы: гидролитические ферменты с оптимумом рН в области 5 (пептиды, эстеразы). Рибосомы: ферменты белкового синтеза. ЭПС: ферменты синтеза липидов, ферменты гидроксилирования, ферменты детоксикации (мети – лирования, ацетилирования), коньюгации. Мембраны: Na –K –АТФаза, аденилатциклаза, ферменты транспорта субстратов. Цитоплазма: ферменты гликолиза, активации аминокислот, синтеза жирных кислот. Мультиферментные системы локализуются в структуре органелл таким образом, что каждый фермент располагается в непосредственной близости от следующего фермента данной последовательности реакции. Благодаря также компартментализации в клетке могут одновременно протекать 2 несовместимых процесса: в -окисление жирных кислот в митохондриях и синтез жирных кислот в цитоплазме).
Дата добавления: 2014-01-06; Просмотров: 406; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |