Аналогичное исследование можно провести, используя ПЦР со случайными 10-членными праймерами

Для диагностики малярии в качестве зонда используют высокоповторяющиеся последовательности ДНК. Из геномной ДНК малярийного плазмодия отбирают клоны, которые дают наиболее яркий сигнал гибридизации с зондом, поскольку именно они предположительно содержат высокоповторяющуюся последовательность. ДНК каждого из отобранных клонов проверяют на способность гибридизоваться с ДНК непатогенных родственных организмов. Отбирают клоны, гибридизующиеся только с патогенной формой плазмодия, и используют их для диагностики.

Промывание фильтра для удаления избытка несвязавшегося меченого ДНК-зонда.

Нанесение меченого одноцепочечного ДНК-зонда, который гибридизуется с ДНК-мишенью.

Фиксация одноцепочечной ДНК-мишени на мембранном фильтре.

Патогенность бактерий определяется наличием у них специфического гена или набора генов, а наследственное генетическое заболеваниевозникает в результпте повреждения определенного гена. Фрагмент ДНК, определяющий данный генетический признак, имеет строго специфическую нуклеотидную последовательность и может служить диагностическим маркером.

Системы ДНК-диагностики.

Изменение потребности фермента в металлических кофакторах. Субтилизины с мутацией в связывающем кальций участке могут сохранять активность без кальция. Модификация нескольких аминокислот повысила стабильность белка в 10 раз.

Замена аспарагина и глутамина на аспарагиновую и глутаминовую кислоты уменьшает термостабильность белка.

Изменяя специфические сайты или целые участки белковой молекулы, можно повысить термостабильность белка, изменить его чувствительность к рН, специфичность, аллостерическую регуляцию, потребность в кофакторе и др. свойства.

Выбор аминокислоты, подлежащей замене, производится с учетом ее роли в функционировании белка. Данные об этом получают в ходе генетических исследований или методом рентгеноструктурного анализа трехмерной структуры белка.

Введение цистеина – образование дисульфидных связей – повышение термостабильности.

Процедура состоит в следующем:

4. Детекция гибридных молекул зонд/мишень.

Для диагностики трипаносомоза (болезнь Чагаса) используют ПЦР с праймерами к фрагменту ДНК длиной 188 п.н., который присутствует во множестве копий в геноме патогенной трипаносомы, но отсутствует у непатогенных видов.

Геномная дактилоскопия. Выделенную из образца и порезанную рестриктазами ДНК разделяют путем электрофореза и переносят на нейлоновый фильтр. Проводят последовательную гибридизацию с 4-5 радиоактивно меченными зондами, каждый из которых распознает определенную последовательность ДНК. В качестве зондов используют минисаттелитную ДНК. Проявляют радиоавтограф и получают набор полос, расположение которых индивидуально для каждого человека.

Дата добавления: 2014-01-07