КАТЕГОРИИ: Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748) |
Подготовка образца
ИММУНОБЛОТТИНГ Оснащение занятия - таблицы, - раздаточный материал: изображения родословных и кариотипы Хронологическая карта занятия: - объяснение преподавателем материала; - решение задач на доске и самостоятельно под контролем преподавателя; - ответы на вопросы по изучаемой теме; - повторение основных положений занятия.
Теоретический обзор:
Причиной многих врожденных нарушений метаболизма являются различные дефекты ферментов,возникающие вследствие изменяющих их структуру мутаций. Биохимичские показатели(первичный продукт гена, накопление патологических метаболитов внутри клетки и во всех клеточных жидкостях больного) более точно отражают сущность болезни по сравнению с показателями клиническими, поэтому их значение в диагностике наследственных болезней постоянно возрастает. Использование современных биохимических методов(электрофореза, хроматографии, спектроскопии и др.) позволяют определять любые метаболиты, специфические для конкретной наследственной болезни. Предметом современной биохимической диагностики являются специфические метаболиты, энзимопатии,различные белки. Объектами биохимического анализа могут служить моча, пот, плазма и сыворотка крови,форменные элементы крови, культуры клеток (фибробласты, лимфоциты). Для биохимической диагностики используются как простые качественные реакции(например, хлорид железа для выявления фенилкетонурии или динитрофенилгидразин для выявления кетокислот), так и более точные методы.
Иммуноблоттинг или вестерн-блоттинг — аналитический метод, используемый для определения специфичных белков в образце. На первом этапе использует электрофорез для разделения денатурированных полипептидов по длине или по трехмерной структуре белка (в нативном состоянии). Далее белки переносят на нитроцеллюлозную мембрану, затем детектируют с использованием антител, специфичных к заданному белку.
Вестерн-блоттинг используется в биохимии, генетике, молекулярной биологии и в других естественно-научных дисциплинах. Вестерн-блоттинг был разработан в лаборатории Джорджа Старка в Стэнфорде.
Образец может быть взят из цельной ткани или из клеточной культуры. В большинстве случаев, твёрдые ткани сначала измельчаются механически с использованием блендера (для образцов большого объёма), с использованием гомогенизатора (меньшие объемы), или обработки ультразвуком. При этом бактерии, вирусы и другие компоненты окружающей среды также являются источником белков. Различные детергенты, соли и буферы могут быть применены для улучшения лизиса клеток и растворения белков. Ингибиторы протеаз и фосфатаз часто добавляются для предотвращения расщепления образцов их собственными ферментами. Подготовка тканей часто выполняется при низких температурах, чтобы избежать денатурации белка. Для разделения различных клеточных компартментов и органелл применяют комбинации биохимических и механических методик фракционирования, в том числе, различные типы фильтрации и центрифугирования.
Дата добавления: 2014-11-25; Просмотров: 329; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы! Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет |