Неспецифічні мітогени лімфоцитів

Реакція бластної трансформації лімфоцитів

Дослідження функціонального стану лімфоцитів

Оцінку кількості субпопуляцій лімфоцитів бажано доповнювати функціональними тестами. У клінічних імунологічних лабораторіях досліджують інтенсивність проліферативної відповіді лімфоцитів на мітогени Т- та В-клітин, а також синтез мононуклеарами периферичної крові низки цитокінів.

Відомо, що низка речовин чинить на лімфоцити ссавців мітогенну дію і викликають їх перетворення на більш молоді, бластні форми (таблиця.).

Таблиця

Мітоген	Походження	Мішень
Фітогемаглютинін (ФГА)	Phaseolus vulqaris - квасоля звичайна	Т-лімфоцити
Конконавалін А (Кон А)	Canavalia ensiformis	Т-лімфоцити
Мітоген лаконосу МЛ (PWM)	Phytolaca americana	В-лімфоцити за присутності Т-лімфоцитів
Ліпополісахариди (ЛПС) грам-позитивних бактерій	E. coli (кишкова паличка) S. thyphi (сальмонела тифу) N. meninqitiqis (нейсерія менінгіту)	В-лімфоцити

Найчастіше для оцінки функціонального стану Т-лімфоцитів використовують ФГА - рослинний лектин, який одержують з квасолі. У ході реакції мононуклеарні лімфоцити, виділені з периферичної крові методом градієнтного центрифугування, культивують за присутності ФГА протягом 72 годин. Результати реакції можна обрахувати двома методами: 1) морфологічним; 2) за включенням радіоактивної мітки.

Морфологічний метод: з культури клітин готують мазки та фарбують за Романовським-Гімзою. У світловому мікроскопі з імерсійною системою визначають відсоток бластів щодо загальної кількості лімфоцитів. Результат може бути виражений також у вигляді індексу стимуляції, що являє собою відношення відсотка трансформованих клітин у культурі з ФГА до відсотка трансформованих клітин у культурі без ФГА.

Облік результатів за включенням радіоактивної мітки є зручним для потужних лабораторій. Принципово відмінним є те, що за 4 - 6 годин до закінчення культивування у лунки вносять ³Н-тимідин. Рівень включення радіоактивної мітки оцінюють на сцинтиляційному електрофотометрі. Результати виражають у імпульсах за хвилину або у вигляді індексу стимуляції.

Особливим значенням вирізняються показники спонтанного та індукованого включення ³Н- тимідину. Підвищення спонтанного рівня проліферації можна трактувати як свідчення наявності ендогенного вогнища стимуляції лімфоцитів, наприклад аутоантигенів, суперантигенів або активних метаболітів.

При проведенні оцінки індукованої проліферації більш інформативним є данні,що свідчать про подавлення відповіді на мітоген. При цьому важливо мати на увазі як абсолютну кількість включень тритію, так і індекс стимуляції. Перший показник відображає максимальні можливості літогенезу лімфоцитів, другий власне відповідь на мітогенний стимул. Ці показники знижуються при різних видах імунодефіцитів, як первинних, генетично обумовленних, так і вторинних.

Цитофлюрометрична оцінка проліферації та фаз клітинного циклу, що заснована на визначенні вмісту в клітинах ДНК:

Для мітотичного ділення клітин необхідна реплікація ДНК. При вступі в клітинних цикл вміст ДНК зростає, а після мітозу повертається до вихідного рівня, що відповідає диплоїдному набору хромосом.

Ці показники можуть використовуватись для діагностики імунодефіцитів та для контроля ефективності лікування імуномодулюючими речовинами.

Дата добавления: 2014-12-17