Методика исследования буферных свойств сыворотки крови по Фриденталю

Методика определения наличия и количества белка в плазме крови.

Для работы необходим ы: плазма крови, 4% раствор цитрата натрия, рефрактометр, дистиллированная вода, таблица Рейса. Объект исследования – человек.

Проведение работы: плазму для исследования получают вышеописанным способом. Для определения наличия белка 1-2 мл полученной плазмы набирают в пробирку, предварительно обработанную 4% раствором цитрата натрия или гепарином. Содержимое пробирки нагревают. Плазма переходит в желеподобное состояние и приобретает вид свернувшегося белка белого цвета. Для определения количества белка в плазме, берут одну каплю плазмы и помещают между призмами рефрактометра, который предварительно настроен в рабочее положение по воде (определить коэффициент преломления дистиллированной воды, составляющий 1,333). Определяют коэффициент преломления исследуемой жидкости. Затем по таблице Рейса находят содержание белка в % или по системе СІ в г/л.

Оформление результатов и их оценка: Результаты необходимо выразить процентным содержанием белка или по системе CІ. У взрослых этот показатель составляет 65-85 г/л.

Для работы необходим ы: образцы сыворотки крови, разведенные в 10 раз; дистиллированная вода; 0,1н раствор НCl; 0,01 н раствор КОН; индикаторы - фенолфталеин, метилоранж; 4 мерных стаканчика; 4 бюретки; 2 пипетки объемом 10 мл. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Для изучения буферных свойств крови берут два мерных стаканчика и заполняют их из бюреток в один 5мл сыворотки крови, в другой -5 мл воды. Чтобы сделать реакцию кислой прибавляют в оба стаканчика по капле метилоранжа и титруют (считая капли) 0,1н раствором HCl до появления не исчезающего при взбалтывании алого окрашивания. Титрование необходимо начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами. Для простоты отсчет титрования ведут в каплях. Записывают, во сколько раз больше капель кислоты понадобится на титрование сыворотки, чем воды, чтобы в обоих стаканчиках получился одинаковый алый цвет.

Затем берут следующие два мерных стаканчика и снова наливают в один -5 мл сыворотки крови, а в другой -5 мл воды. Чтобы сделать реакцию щелочной прибавляют в каждый стаканчик по капле фенолфталеина и, считая капли, титруют 0,01н раствором КОН до не исчезающего в течение 1 мин слабого фиолетового окрашивания (для более точного сравнения необходимо поставить оба стаканчика рядом на белую бумагу). Считают капли раствора щелочи едкого натра при титровании воды и сыворотки. Устанавливают, во сколько раз больше КОН понадобилось на титрование сыворотки, чем воды.

Оформление результатов и их оценка: Полученные результаты необходимо записать и сравнить данные, полученные при титровании сыворотки кислотой и щелочью. Отметить, во сколько раз буферные способности сыворотки нейтрализовать кислоту отличаются от ее способности нейтрализовать щелочь. В условиях нормы для того, чтобы сделать реакцию сыворотки щелочной (по фенолфталеину), к ней необходимо добавить в несколько десятков раз (40-70) больше едкого натра, чем к дистиллированной воде. А чтобы сделать реакцию кислой (по метилоранжу), к сыворотке необходимо добавить в несколько сотен раз (300-400) больше соляной кислоты, чем к дистиллиованной воде. Постоянство рН крови обеспечивается буферными системами и является жесткой константой крови, которая колеблется в узких пределах и составляет 7,36-7,4.

Дата добавления: 2014-11-28