Студопедия

КАТЕГОРИИ:


Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748)

Серологические реакции при сифилисе




 

Для диагностики сифилиса, особенно в латентной и поздней стадиях, а также для оценки успешности проводимого лечения важнейшее значение имеют серологические исследования. Однако вследствие сложного антигенного состава бледной трепонемы, тело которой содержит два липидных (ранее применялся термин «липоидные») компонента, протеиновые и полисахаридные антигены, в сыворотке крови больных отмечается множественность антител. В различных стадиях болезни преобладают то одни, то другие антитела, относящиеся к разным классам иммуноглобулинов. Поэтому в современной венерологии одновременно используется несколько серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить на следующие основные группы.

 

I. Липидные (реагинные) реакции:

а) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами — реакция Вассермана (РВ);

б) осадочные реакции (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса—Витебского и др.);

в) микрореакция на стекле с липидными антигенами (экспресс-метод серодиагностики, VDRL, CMF, RPR и др.).

II. Групповые трепонемные реакции:

а) РСК с протеиновым трепонемным антигеном Рейтера;

б) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

в) реакция иммунного прилипания (РИП).

III. Видоспецифические протеиновые трепонемные реакции.

а) реакция иммобилизация бледных трепонем (РИБТ);

б) РИФ-абс и ее варианты (IgM - FTA - ABS, 19S-IgM- FTA- ABS),

в) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем.

Реакция Вассермана. Разработана А. Вассерманом совместно с А. Нейссером и Бруком в 1906 г. Исторически это первый серологический метод диагностики сифилиса. Реакция основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде—Жангу) и определяет противолипидные антитела (реагины). Несмотря на то что за этими антителами утвердился термин «реагины», к истинным реагинам, обусловливающим развитие иммунопатологических реакций I типа (анафилактический шок, атопии), они не имеют отношения. По современным представлениям, в реакции Вассермана определяются антитела к липидам макроорганизма, а не бледной трепонемы. С помощью этой реакции выявляется, по-видимому, аутоиммунный процесс, вызванный денатурированием бледными трепонемами тканей макроорганизма с образованием липопротеидного комплекса (конъюгата), в котором липиды (гаптен) являются детерминантом.

 

Реакция Вассермана, которая широко используется и в настоящее время, обычно ставится с двумя или тремя антигенами. Чаще применяют отличающийся высокой чувствительностью кардиолипиновый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трепонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь апатогенных культуральных трепонем). Эти антигены образуют совместно с реагинами сыворотки крови больного иммунный комплекс, способный адсорбировать, связывать комплемент. Так как образованный комплекс (реагины + антиген + комплемент) невидим, то для определения наступившего связывания комплемента необходима как индикатор гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент связан в первой фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), то гемолиз не наступит, эритроциты выпадут в осадок, легко заметный невооруженным глазом (РВ положительная). Если в первой фазе комплемент связан не будет вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, то он будет использован гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная).

 

Степень выраженности гемолиза в реакции Вассермана оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза 4 + (РВ резкоположительная), едва начавшийся гемолиз 3+ (РВ положительная), значительный гемолиз 2+ (РВ слабоположительная), полный гемолиз —РВ отрицательная. Кроме качественной оценки РВ, имеется и количественная постановка ее с различными разведениями сыворотки (1:10, 1:20, 1:80, 1:160,

1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых форм сифилиса и при контроле за успешностью терапии.

Реакция Вассермана становится положительной лишь через 2—4 нед после возникновения первичной сифиломы (иногда позже), через 10—12 нед после заражения, причем титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимума (1:160—1:320 и выше) при появлении генерализованных высыпаний (сифилис вторичный свежий). Затем титр реагинов постепенно падает и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80—1:120. При скрытом и третичном сифилисе, как правило, имеет место низкий титр реагинов (1:20—1:40). Быстрое снижение титра реагинов вплоть до полной негативации во время противосифилитической терапии свидетельствует об ее эффективности.

Реакции Ваесермана присущи существенные недостатки, ограничивающие ее применение:

1) недостаточная чувствительность. РВ отрицательная в начале первичной стадии, бывает негативной и у 1/3 больных третичным активным сифилисом с поражениями кожи, слизистых оболочек, костей, внутренних органов, центральной нервной системы, поздним врожденным сифилисом, особенно если они в прошлом подвергались лечению антибиотиками;

2) недостаточная специфичность. РВ может быть положительной у лиц, никогда не болевших и не болеющих сифилисом. Например, ложноположительные (неспецифические) результаты РВ наблюдаются у многих больных лепрой, иногда при малярии, аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка), распадающихся злокачественных новообразованиях, обширных инфарктах миокарда и других заболеваниях, а порой и у совершенно здоровых людей. Кратковременная неспецифическая позитивация РВ наблюдается у ряда женщин непосредственно перед родами и сразу после них, у наркоманов, после наркоза, приема алкоголя и т. п.

Ложноположительная РВ, как правило, выражена слабо, т. е. выпадает чаще с низким титром реагинов (1:5—1:20), или положительная (3+) и слабоположительная (2+). В целом при массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов РВ составляет около 0,1-0,15%.

Чтобы до известной степени преодолеть недостаточную чувствительность РВ, применяют постановку ее на холоду (реакция Колмера), а также ставят ее одновременно с другими серологическими реакциями. В СССР реакция Вассермана обязательно применяется в комплексе с двумя осадочными реакциями (Кана и Закса—Витебского). Иммунологическая сущность этих реакций ничем не отличается от РВ, но для них готовят более концентрированные антигены, которые при взаимодействии с реагинами сыворотки дают видимый глазом осадок, оцениваемый качественно (4+, 3+ и т. д.).

Экспресс-метод (микрореакция на стекле). Эта реакция также относится к липидным реакциям. Ставится со специальным кардиолипиновым антигеном и основана на реакции преципитации. Результаты оцениваются качественно как 4+, 3+, 2+ и отрицательные. Преимуществом экспресс-метода являются быстрота получения ответа (через 30—40 мин), небольшой объем необходимой для анализа крови (2—3 капли плазмы или сыворотки). Ложноположительные результаты при экспресс-методе получают чаще, чем при РВ, поэтому он разрешен для применения только как отборочная реакция при массовых обследованиях населения на сифилис и при обследовании больных в клинико-диагностических лабораториях соматических больниц. Окончательный диагноз сифилиса этим методом устанавливать запрещено. Экспресс-метод нельзя применять у беременных, доноров, а также для контроля после лечения больных сифилисом.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ). Эта реакция освоена многими лабораториями нашей страны. Она относится к групповым трепонемным реакциями и в СССР ставится в двух модификациях — РИФ-10 и РИФ-200, т. е. с разведением испытуемой сыворотки в 10 и 200 раз. РИФ-10 более чувствительна, но чаще дает неспецифические положительные результаты, чем РИФ-200, отличающаяся высокой специфичностью.

РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном для РИФ служат тканевые патогенные бледные трепонемы, фиксированные к предметным стеклам, на которые наносят исследуемую сыворотку. При наличии в последней противотрепонемных антител они вступают в иммунологическую связь с антигеном — трепонемами. Бледные трепонемы, прочно соединенные с термостабильными противотрепонемными антителами, относящимися к IgM и IgG, выявляются при помощи антивидовой («противочеловеческой») флюоресцирующей сыворотки в люминесцентном микроскопе. Учет РИФ проводится путем оценки свечения трепонем в препарате. Если в сыворотке не было противотрепонемных антител, то трепонемы не видны. При наличии антител видно свечение трепонем, степень которого обозначают плюсами — от 1+ до 4+.

 

РИФ становится положительной (особенно РИФ-10) несколько раньше, чем РВ. По некоторым данным, положительная РИФ бывает у 80% больных первичным серонегативным сифилисом. Во вторичном периоде РИФ положительная почти в 100% случаев. Она всегда положительная при латентном сифилисе и дает 95—100% положительных результатов при поздних формах заболевания и врожденном сифилисе.

Специфичность РИФ может быть повышена путем предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом — ультраозвученным трепонемным антигеном, связывающим групповые антитела (РИФ—абс).

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Эта реакция предложена в 1949 г. Р.Нельсоном и М.Мейером и является наиболее специфичным тестом на сифилис, но она дорога и сложна в постановке, что ограничивает ее применение. РИБТ основана на определении в сыворотке крови больных видеоспецифичных антител—иммобилизинов, обусловливающих неподвижность бледных трепонем в присутствии комплемента. Антигеном служат живые патогенные бледные трепонемы от зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность, иммобилизованных, трепонем ведется под микроскопом. РИБТ считается положительной при иммобилизации от 51 до 100% трепонем, слабоположительной — от 31 до 50%, сомнительной — от 21 до 30%, отрицательной—от 0 до 20%.

РИБТ становится положительной значительно позже, чем РИФ и РВ. Поэтому для диагностики заразных форм сифилиса она не применяется, хотя во вторичном периоде бывает положительной у 85—100% больных. При третичном сифилисе, при специфических поражениях внутренних органов, нервной системы, при врожденном сифилисе, когда РВ часто отрицательная, РИБТ дает положительные результаты в 98—100% случаев. Следует учитывать, что РИБТ может оказаться ложноположительной, если в исследуемой сыворотке содержатся трепонемоцидные вещества (например, пенициллины, тетрациклины, эритромицин), вызывающие неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем. Поэтому нельзя исследовать кровь на РИБТ ранее 2 нед после окончания приема антибиотиков и других противосифилитических препаратов.

РИБТ, как и РИФ, очень медленно негативируется в процессе противосифилитической терапии. Вследствие этого она непригодна для контроля за ходом противосифилитической терапии.

Показания к постановке трепонемных реакций (РИБТ и РИФ):

1. Подтверждение специфичности комплекса липидных реакций при диагностике скрытых форм сифилиса. Если наличие сифилитической инфекции предполагается только на основании положительной РВ и (или) других липидных реакций, положительный результат РИБТ и РИФ служит доказательством существования скрытого (латентного) сифилиса (В тех случаях, когда нет возможности поставить трепонемные реакции, диагноз скрытого сифилиса может быть в виде исключения установлен только на основании двукратного резкоположительного (4+) результата стандартных (липидных) серологических реакций, взятых с интервалом не менее 2 нед. Все же в этих случаях желательно переслать в соответствующую лабораторию высушенную сыворотку крови для исследования на РИФ и РИБТ).

2. Подозрение на наличие неспецифической (ложноположительной) РВ и других липидных реакций у больных системной красной волчанкой, лейкозами и с другими состояниями несифилитической природы. Если у больного с положительной РВ трепонемные реакции (РИБТ и РИФ-200) повторно дают отрицательные результаты, это подтверждает неспецифический характер РВ.

3. Подозрение на поздние (третичные) сифилитические поражения внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы у больных с отрицательной РВ.

4. Подозрение на первичный серонегативный сифилис у лиц, у которых при многократной микроскопии не удается обнаружить бледные трепонемы в отделяемом первичной сифиломы и в пунктате из увеличенных лимфатических узлов (только РИФ-10).

5. Обследование лиц с отрицательной РВ, состоящих в длительном контакте с больными сифилисом, если имеется подозрение, что эти лица в недавнем прошлом подвергались лечению трепонемоцидными препаратами, вызвавшими негативацию РВ.

Техника взятия крови для серологических реакций. Кровь для исследования на РВ, РИФ и РИБТ берут из локтевой вены натощак или не ранее чем через 4 ч после приема пищи шприцем или одной иглой (самотеком). Шприц и игла должны быть после стерилизации промыты изотоническим раствором хлорида натрия (нельзя промывать водой, спиртом, кислотами, щелочами). В чистую и сухую пробирку вливают 5—7 мл крови (пробирка для исследования на РИБТ должна быть специально подготовлена и стерильна).

Кровь для исследования экспресс-методом берут из кончика пальца, как это делают при взятии ее на СОЭ, но берут на один капилляр больше. Можно также экспресс-метод ставить с сывороткой крови, полученной венепункцией.

При необходимости для исследования в отдаленных лабораториях можно вместо крови пересылать сухие сыворотки. Для этого на следующий день после забора крови сыворотку отделяют от сгустка. Затем набирают 1 мл сыворотки в шприц и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску плотной писчей бумаги, вощанки или целлофана размером 6X8 см. На свободном крае бумаги надписывают фамилию, инициалы больного и дату забора крови. Сыворотку на бумаге защищенную от прямых лучей солнца и пыли, оставляют до следующего дня при комнатной температуре; она засыхает в виде небольших кружочков блестящей желтой стекловидной пленки. После этого полоски бумаги с высушенной сывороткой свертывают так, как завертывают аптечный порошок, и отсылают в лабораторию с указанием диагноза и повода для исследования.




Поделиться с друзьями:


Дата добавления: 2014-12-27; Просмотров: 2653; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы!


Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет



studopedia.su - Студопедия (2013 - 2024) год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! Последнее добавление




Генерация страницы за: 0.018 сек.