Характеристика ростовой активности микроорганизмов

Характеристика жизнеспособности протопластов и клеток редуктазным методом

Развивающиеся живые микроорганизмы вырабатывают фермент редуктазу, которая восстанавливает метиленовую синь в её бесцветное лейкосоединение.

Оценку редуктазной активности измеряли по следующей схеме:

1. отмеряли 1 мл раствора микроорганизмов в питательном бульоне и 1 мл раствора протопластов, полученных ферментативным лизисом, разбавляли их 9 мл воды;

2. получали по три разведения по схеме: 0,5 мл полученных растворов и 4,5 мл физраствора;

3. в полученные пробы добавляли 1 мл метиленового синего и засекали время, за которое содержимое обесцветиться.

Для определения ростовой активности проводили эксперимент в следующей последовательности:

1. отбирали 1 см³ микробной суспензии каждой из культур, приготовленных на основе физраствора, переносили в стерильную пробирку и заливали 9 см³ питательного бульона. Оставляли приготовленный раствор в термостате при 37°С на два часа;

2. измеряли оптическую плотность полученного раствора с периодичностью 1 час, в течение которого культура выдерживалась в термостате.

Ростовая активность микроорганизмов при этом проявлялась через увеличение числа клеток и, как следствие, увеличение оптической плотности исследуемых растворов. Характеристика ростовой активности рассчитывалась по формуле:

(7)

где D – оптическая плотность исследуемой суспензии;

t – длительность периода выстойки (1 час).

Дата добавления: 2014-01-04