Красители и реактивы для окраски кислотоустойчивых бактерий

Выявление кислотоустойчивости бактерий методом Циля—Нильсена

Красители и реактивы для окраски по Граму.

1. Феноловый раствор генциана фиолетового, генциан фиолетовый — 1 г, спирт 96%-ный — 10 мл, фенол кристаллический — 2 г, вода дистиллированная — 100 мл.

В некоторых случаях применяют спиртовой раствор генциана фиолетового: генциан фиолетовый (или кристаллический фиолетовый) — 1 г. спирт 96%-ный (ректификат) — 100 мл, глицерин — 5 мл. Бутыль со смесью ставят в термостат на 24 ч (можно и дольше), затем фильтруют.

2. Раствор Люголя (иодит калия — 2 г, иод кристаллический — 1г, вода дистиллированная — 300 мл). Вначале готовят концентрированный раствор иодита калия в 5 мл воды, в нем растворяют иод, потом добавляют воду до 300 мл.

3. Спирт 96 %-ный.

4. Фуксин Пфейфера (водный раствор карболового фуксина Циля): 1 мл карболового фуксина Циля (см. 3.2.2) и 9 мл дистиллированной воды.

Кислотоустойчивость — свойство, наиболее характерное для микобактерий и некоторых актиномицетов. Оно связано с особенностями химического состава клеточных стенок, главным образом — с наличием в них миколовых кислот. Кислотоустойчивость проявляется в том, что клетки с трудом воспринимают красители, а при окрашивании — прочно их удерживают.

До фиксации мазка бактерий на пламени препарат готовят обычным способом (см. 2.2.1). Далее на фиксированный в пламени и остывший препарат помещают полоску фильтровальной бумаги, обильно смачивают ее карболовым фуксином Циля и нагревают препарат над пламенем 5 мин. Нельзя допускать высыхания препарата: в случае необходимости следует добавить 1—2 капли воды. Нельзя также доводить краситель до кипения: как только появятся пары, препарат отводят в сторону. По окончании окрашивания и охлаждения препарата бумагу удаляют, а мазок промывают слабой струей водопроводной воды до исчезновения окраски в стоке. Затем препарат промокают фильтровальной бумагой и погружают на 3—5 с в 5%-ный раствор H₂SO₄ или 3%-ный раствор НСl. Еще раз промывают препарат водой, промокают и окрашивают в течение 3—5 мин метиленовым синим Леффлера. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые — в синий.

1. Карболовый фуксин Циля: фуксин основной — 1 г, карболовая кислота кристаллическая (фенол) — 5 г, спирт 96%-ный — 10 мл, глицерин — несколько капель, вода дистиллированная — 100 мл. Основной фуксин растворяют в этаноле и затем добавляют растворенный в воде фенол. Раствор тщательно перемешивают и оставляют на несколько дней. Перед использованием его фильтруют.

2. Метиленовый синий Леффлера:. 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего смешивают со 100 мл 0,01%-ного раствора КОН. Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего готовят следующим образом: 1,6 г метиленового синего растворяют в 100 мл 95%-ного этилового спирта.

3. Серная кислота — 5%-ный раствор или соляная кислота — 3%-ный раствор.

Дата добавления: 2014-01-04