Учет на плотных средах

После инкубации засеянные среды вынимают из термостата и в них подсчитывают число колоний.

Одновременно после сушки бюксов с навесками при 105 °С до постоянной массы определяют содержание абсолют­но сухой почвы в 1 г анализируемой сырой почвы (см. 5.1.1).

При подсчете колоний на богатых плотных питатель­ных средах (МПА, МПА + сусло-агар, КАА, сусло-агар, среда Чапека, среда Эшби и т. д.) закрытые чашки Петри просмат­ривают в проходящем свете и с внешней стороны колонии отмечают чернилами или тушью. Чтобы не пропустить мел­кие колонии, чашки дополнительно просматривают под лу­пой. Желательно использовать специальный прибор с ариф­мометром.

Число колоний на бедных средах (нитритный агар, «го­лодный» агар, агаризованный почвенный экстракт и т. д.) определяют под микроскопом (окуляр 10х и объектив 3х, в крайнем случае — окуляр 10х и объектив 8х).

В чашках Петри сначала учитывают колонии в 100 полях зрения, затем определяют среднее арифметическое для одного поля зрения. Для определения числа колоний на всей чашке среднее число колоний в одном поле зрения умножают на ко­эффициент (К), который равен площади чашки Петри (Р), де­ленной на площадь поля зрения (р):

Диаметр чашки Петри измеряют линейкой, а диаметр поля зрения — под микроскопом, используя для малых увели­чений миллиметровую бумагу, а для больших (объективы 40х и 90х) — объективный микрометр.

Подсчитав при поверхностном посеве число колоний на чашке, находят содержание клеток в 1 мл соответствующего разведения, умножая число колоний на 20, так как посеяно было 0,05 мл суспензии. Чтобы определить количество клеток в 1 г сырой почвы, их содержание в 1 мл умножают на степень разведения (10³ , 10⁴,10⁵ и т. д.).

Дня учета микроорганизмов в 1 г абсолютно сухой почвы число клеток в 1 г сырой почвы делят на количество абсолют­но сухой почвы, содержащейся в 1 г сырой почвы.

Пример расчета. Установлено, что при поверхностном посеве почвенной суспензии из разведения 10^-3 число колонии на чашке равно 52; влажность почвы — 25%; при такой влажности 1 г сырой почвы содержит 0,75 г абсолютно сухой почвы. Число клеток в 1 г абсолютно сухой почвы (х) определяют следующим образом:

При глубинном посеве число колоний в 1 г абсолютно сухой почвы подсчитывают так же, но не умножают на 20, так как при высеве используют 1 мл суспензии, а не 0,05 мл.

Подсчет желательно проводить и в пересчете на 1 г гуму­са или на 1 мг азота. В этих случаях параллельно определяют содержание гумуса или азота в почве.

Учет микроорганизмов на МПА. Проводят его визуально на 4-й день после посева. При наличии колоний В. Mycoides количество микроорганизмов определяют на 2-й или 3-й день. После подсчета всех колонии на чашке их группируют по культуральным признакам и определяют роды (а иногда и виды) микроорганизмов.

Учет микроорганизмов на КАА. Колонии на таком агаре подсчитывают на 7—10-й день. Из общего количества микроорганизмов отдельно учитывают: пигментированные формы— жёлтые и другие микобактерии, образующие мелкие куполо­образные колонии, актиномицеты (Streprtomyces).

Отмечают окраску колонии, воздушного мицелия (серая, белая, зеленовато-серая, розовая) и среды (выделение пигмента в субстрат). Для описания пигментации можно использовать специальные пособия по определению цвета.

При идентификации актиномицетов описывают консистенция колонии (плотные, кожистые, рыхлые), поверхность (мучнистая, бархатистая) и запах (землистый, эфирный, фруктовый).

Учет микроорганизмов на бедной среде — нитритном агаре ( см. 10.2-1). Колонии определяют под микроскопом на 6 — 7-й день культивирования. Если на колониях появляются Рrotozoa, об их наличии судят по образованию цист, которые хо­рошо просматриваются при малом увеличении объектива. Подсчёт проводят после 6 сут инкубации.

По культуральным признакам выделяют следующие роды:

· Nocardia — колонии пастообразные, слизистые, сухие, по переферии образуется мицелиальная зона или мицелиальный ободок ( рис. 27. а), состоящий из субстратного и надсубстратного мицелия. В центре колонии чаще преобладают пигментированные гифы, состоящие из палочковидных и кокковидных клеток. Колонии бесцветные, лимонно-желтые, желтые, розовые, красные;

	Рисунок 27 - Характер роста колоний на бедной среде (нитритном агаре): а — Nocardia; б - Arthrobacter

· Mycobacterium (см. 6.1.3);

· Arthrobacter - колонии мелкие, плоские или слегка приподнятые, бесцветные, иногда с зеленовато-желтым оттенком. По их периферии образуется кружевной или складчатый ободок (рис. 27. б). У отдельных представителей края колоний зарублённые. Молодая культура состоит из мелких искривлённых палочек, затем они довольно быстро распадаются, чаще — на кокковидные клетки;

· Микромопоспоры — их компактный мицелий полностью погружен в субстрат и едва заметен под микроскопом. На поверхности агара кольцеобразно или радиально располагаются бесцветные или темноокрашенные комочки слизи, содержа­щие споры;

· Bactoderma — колонии мелкие в виде розоватой или бе­лой бархатистой пленки; и центре она — складчатая, а по периферии — стекловидная; край колоний волнистый или лопастный.

Учет на среде Эшби. Проводят на 5—6-е сут. Отдельно подсчитывают колонии азотобактера— плоские, слизистые, мажущейся консистенции, диаметром 5—10 мм, и олигонитрофильные бактерии — мелкие, слизистые, бесцветные коло­нии. Олигонитрофильные дрожжи — Lipomyces — образуют слизистые молочно-белые колонии.

Учет грибов на агаровых средах. Колонии грибов ил сусло-aгape или среде Чапека подсчитывают через 2 сут инкуба­ции. После 7 сут определяют родовой состав.

В ночке часто встречаются грибы родов: Mucor, Rhizopux, Рenicilliuт, Asperguillus, Alternaria, Fusarium, Macrosporium, Chaetomium, Cephalosporum, Phoma, Coremium, Trichoderma, Trichothecium, Stachybotrys.

Дата добавления: 2014-01-04