Дифференцирующий метод Грача

Приготовление препарата для микроскопического исследования

Окраска по Граму.

1 этап - приготовление мазка.

Предметное стекло обжигают в пламени газовой горелки. Восковым карандашом отмечают пределы будущего мазка в виде окружности диаметром 1-2 см. и кладут стекло на стол. Прокален­ной петлёй наносят в середину кружка небольшую каплю стерильного изотонического раствора хлорида натрия (ИХН). Затем в эту каплю вносят небольшое количество культуры бактерий, тща­тельно эмульгируют и распределяют тонким слоем в пределах кружка. Мазки из бульонных куль­тур готовят без предварительного нанесения ИХН.

2 этап - высушивание.

Стекло оставляют на воздухе до исчезновения влаги.

3 этап - фиксация.

Фиксацию проводят для того, чтобы убить микробы, прикрепить их к стеклу, повысить их восприимчивость к красителям. Для фиксации предметное стекло (мазком вверх) трижды накла­дывают на пламя горелки на 2-3 секунды с интервалом 4-6 секунд. Мазки из гноя, крови, мокроты, отечной жидкости фиксируют погружением в фиксирующие жидкости (ацетон, смесь Никифоро­ва). Такая фиксация позволяет избежать грубых деформаций объекта исследования.

4 этап - окраска.

Различают простые и сложные (дифференцирующие) способы окраски. Простые способы по­зволяют судить о величине, форме, локализации и взаимном расположении клеток. Сложные спо­собы позволяют установить структуру микробов и часто их неодинаковое отношение к красите­лям. Примером простых способов может служить окраска фуксином (1-2 минуты), метиленовым синим или кристаллвиолетом (3-5 минут), а сложных - окраска по Граму, Романовскому-Гимзе, Циль-Нильсену.

После окраски этим методом одни бактерии, окрашиваются в темно-фиолетовый цвет (грамположительные, Гр+). другие - в бордово-красный (грамотрицательные, Гр-). Сущность этого способа окраски состоит в том, что Гр+ бактерии прочно фиксируют комплекс из генцианвиолета и йода, не обесцвечиваясь этанолом. Гр- бактерии после обесцвечивания докрашивают фуксином.

Гр + бактерии кокки	Гр - бактерии кокки
стафилококки, стрептококки; палочки (споро-образующие): бациллы, клостридии; папочки (неспорообразующие): коринебактерии, микобактерии, актиномицеты	нейссерии, вейллонеллы; палочки (неснорообразующие): энтеробактерии, вибрионы; извитые: спириллы, спирохеты, кампилобактерии.

Этапы окраски по Грамму

Этап окраски	Цвет
Гр + бактерии	Гр - бактерии
Генцианвиолет (2 мин.)	фиолетовый	фиолетовый
Раствор Люголя (1 мин.) - закрепление окраски	фиолетовый	фиолетовый
Этанол + йод (30 сек.) - избират. обесцвечивание Гр- бактерий	фиолетовый	обесцвечивание
Фуксин (1 мин.), докрашивание Гр- бактерий	фиолетовый	бордовый
Промывание водой

Основные формы бактерий

Шаровидные	Палочковидные	Извитые
микрококки (одиночные)	собственно бактерии	спириллы
диплококки (пары)	спорообразующие	спирохеты
стрептококки (цепочки)	(бациллы, клостридии)	кампилобактеры
тетракокки (4 клетки)	изогнутые палочки (вибрионы)
сарцины (тюки, пакеты)
стафилококки (гроздья)

Дата добавления: 2014-01-05